Лаборатория диагностики аутоиммунных заболеваний. СПбГМУ им.ак.И.П.Павлова.

 

        
 
 

как нас найти          о лаборатории          направление и прейскурант СПбГМУ          Публикации          Вакансии          Задать вопрос!          полезные ссылки          

  Аутоиммунные заболевания
     Аутоиммунные заболевания, определение
     Аутоиммунные заболевания, эпидемиология
     Аутоантитела при аутоиммунных процессах
     Аутоиммунные заболевания, диагностика
     Клиническая лабораторная эпидемиология
  Системные ревматические заболевания
     Антинуклеарные антитела (АНА)
     Классификация и методы определения АНА
     Антинуклеарный фактор (АНФ) и тип свечения
     Антинуклеарный фактор на клеточной линии HEp-2 (код 01.02.15.005)
     Антитела к экстрагируемому нуклеарному антигену ENA (код 01.02.15.160)
     Скрининг болезней соединительной ткани (код 01.02.15.245)
     Антитела к двуспиральной дсДНК (дсДНК-NcX), тест второго поколения (тест 01.02.15.124)
     Антитела к нуклеосомам, тест второго поколения (код 01.02.15.425)
     Обследование при СКВ (системной красной волчанке) код 01.02.15.230
     Дифференциальная диагностика СКВ и других ревматических заболеваний (код 01.02.15.430)
     Иммуноблот антинуклеарных антител (код 01.02.15.165)
     Иммуноблот антинуклеарных антител при склеродермии (код 01.02.15.535)
     DAT/Кумбс: скрининг полиспецифических агглютининов (код 01.02.15.890)
     DAT/Кумбс: профиль моноспецифических агглютининов (код 01.02.15.895)
     Холодовые агглютинины (код 01.02.15.900)
     Антитела к дсДНК, подтверждение на Cr.luciliae (код 01.02.15.905)
     Антитела к лимфоцитам, класса IgG (код 01.02.15.925)
  Ревматоидный артрит и артропатии
     Диагностика ревматоидного артрита, критерии
     Диагностика ювенильного артрита
     Диагноз серонегативных артропатий
     АЦЦП анализ: Антитела к циклическому цитруллиновому пептиду, АЦЦП/ССP/ACPA (код 01.02.15.081)
     Антитела к модифицированному цитруллинированному виментину), АМЦВ/ MCV (код 01.02.15.405)
     Ревматоидный фактор (РФ), общее содержание (код 01.02.15.015)
     Антикератиновые антитела, АКА (код 01.02.15.065)
     Ревматоидный фактор класса IgA (код 01.02.15.585)
     Скрининг ревматоидного артрита (код 01.02.15.410)
     Типирование гена HLA B27 (код 01.02.15.307)
     Кристаллы в синовиальной жидкости: диагностика микрокристаллических артопатий (код 01.02.15.385)
  Антифосфолипидный синдром (АФС), патогенез и диагностика
     Критерии диагностики антифосфолипидного синдрома
     Антитела к кардиолипину (АКЛА) классов IgG и IgM (код 01.02.15.145)
     Антитела к бета-2 гликопротеину (код 01.02.15.225)
     Антитела к фосфатидилсерину-протромбину (PS-PT) (код 01.02.15.615)
     Антитела к аннексину V (А5), классов IgG и IgM (код 01.02.15.291)
     Антитела к тромбоцитам класса IgG (код 01.02.15.487)
     Иммуноблот антифосфолипидных антител IgG/IgM (код 01.02.15.875)
  Диагностика васкулитов и поражения почек, Антитела к цитоплазме нейтрофилов
     Классификация первичных васкулитов
     Диагностика васкулитов крупных сосудов
     Диагностика гранулематозных васкулитов
     Диагноз иммунокомплексных васкулитов
     Антинейтрофильные цитоплазматические антитела (АНЦА/ANCA) класса IgG (код 01.02.15.010)
     Антитела к эндотелию на клетках HUVEC (код 01.02.15.395)
     Антитела к протеиназе 3 (ПР-3/PR-3) класса IgG (код 01.02.15.140)
     Антитела к миелопероксидазе (МПО) (код 01.02.15.135)
     Антитела к антигенам антинейтрофильных антител ANCA-панель (код 01.02.15.415)
     Диагностика гранулематозных васкулитов (код 01.02.15.035)
     Антитела к базальной мембране клубочка (код 01.02.15.085)
     Диагностика быстропрогрессирующего гломерулонефрита (код 01.02.15.090)
     Антитела к C1q фактору комплемента (код 01.02.15.365)
     Антитела к рецептору фосфолипазы А2 (PLA2R), диагностика мембранозного гломерулонефрита (код 01.02.15.311)
     Антинейтрофильные антитела (код 01.02.15.680)
  Аутоиммунные заболевания легких и сердца
     Активность АПФ (Ангиотензин-превращающий фермента), диагностика саркоидоза, код 01.02.15.370)
     Неоптерин в сыворотке крови (код 01.02.15.470)
     Антитела к миокарду (код 01.02.15.170)
     Диагностика воспалительных миокардиопатий (код 01.02.15.335)
  Аутоиммунные заболевания печени
     Антитела к гладким мышцам (F-актину) (код 01.02.15.040)
     Антитела к микросомам печени почек, LKM-1 (код 01.02.15.055)
     Антитела к митохондриям АМА (М1-М9) (код 01.02.15.045)
     Антитела к асиалогликопротеиновому рецептору (anti-ASGPR) класса IgG (01.02.15.635)
     Скрининг аутоиммунного поражения печени (01.02.15.060)
     Иммуноблот аутоантител при аутоиммунных заболеваниях печени (код 01.02.15.306)
     Развернутая серология аутоиммунных заболеваний печени (код 01.02.15.301)
  Целиакия лабораторная диагностика, анализы у детей и взрослых
     Целиакия (глютеновая энтеропатия), определение и история описания
     Генетика целиакии - типирование HLA-DQ2 и HLA-DQ8 (тест 01.02.15.431) для определения риска целиакии
     Антитела к тканевой трансглютаминазе (ТТГ) класса IgA (TG2) (код 01.02.15.191)
     Антитела к тканевой трансглютаминазе класса IgG (код 01.02.15.186)
     Антитела к глиадину (дезаминированные пептиды глиадина) класса IgG (код 01.02.15.176)
     Морфология и клинические проявлении целиакии
     Распространенность и эпидемиология целиакии
     Антитела и критерии диагностики целиакии
     Антитела к эндомизию IgA (код 01.02.15.195)
     Антитела к дезамидированным пептидам глиадина (ДПГ) класса IgA (код 01.02.15.181)
     Антитела к ретикулину классов IgA и IgG (код 01.02.15.200)
     Скрининг целиакии (код 01.02.15.211)
     Серологическая диагностика (уточнение диагноза) целиакии (код 01.02.15.215)
     Полное обследование при целиакии, развернутая серология (код 01.02.15.221)
     Диагностика целиакия без боли у детей и взрослых
  Аутоиммунный гастрит и лактазная недостаточность
     Антитела к обкладочным (париетальным) клеткам желудка (код 01.02.15.050)
     Антитела к внутреннему фактору (фактору Кастла) (код 01.02.15.546)
     Диагностика аутоиммунного гастрита и пернициозной анемии (код 01.02.15.610)
     Альфа 1-антитрипсин в стуле, кишечная потеря белка (код 01.02.15.502)
     Ионнный дефицит стула (Остаточная осмолярность, Stool osmotic gap) (код 01.02.15.489)
  Поражения ЖКТ, болезнь Крона, язвенный колит и аутоиммунный панкреатит
     Аутоиммунные заболевания и онкологические заболевания ЖКТ
     Скрытая кровь (гемоглобин) в кале (FOB) в диагностике колоректального рака
     НПВС энтеропатия и фекальные биомаркеры
     Кальпротектин фекальный и другие биомаркеры воспаления при ВЗК
     Кальпротектин фекальный (код 01.02.15.550)
     Гемоглобин в стуле - FOBT (код 01.02.15.720)
     Скрининг заболеваний желудочно-кишечного тракта - FOBT и кальпротектин (код 01.02.15.735)
     Антитела к Saccharomyces cerevisiae (ASCA) и другие антигликановые антитела
     Антинейтрофильные цитоплазматические антитела (АНЦА) при ВЗК
     ASCA анализ: Антитела к сахаромицетам класса IgG (код 01.02.15.250)
     Антитинейтрофильные цитоплазматические антитела (АНЦА) класса IgA (код 01.02.15.460)
     Диагностики болезни Крона и язвенного колита (код 01.02.15.256)
     Антитела к бокаловидным клеткам кишечника (код 01.05.15.486)
     Антитела к экзокринной части поджелудочной железы (код 01.02.15.675)
     Антитела к GP2 антигену классов IgG и IgA (код 01.02.15.631)
     IgG4-ассоциированный аутоиммунный панкреатит
     IgG4-ассоциированные заболевания: панкреатит, сухой синдром, ретроперитонеальный фиброз (болезнь Ормонда), тиреоидит (болезнь Риделя)
     Иммуноглобулин подкласс IgG4, диагностика аутоиммунного панкреатита (код 01.02.15.540)
  Аутоиммунные неврологические заболевания
     Олигоклональный иммуноглобулин IgG в ликворе и сыворотке крови (код 01.02.15.155)
     Антитела к аквапорину 4, диагностика оптиконевромиелита (болезни Девика) (код 01.02.15.576)
     Антитела к NMDA глютаматному рецептору (код 01.02.15.456)
     Антинейрональные антитела, иммуноблот (код 01.02.15.401)
     Антитела к ганглиозидам, иммуноблот (код 01.02.15.620)
     Антитела к ацетилхолиновым рецепторам, АхР, AchR (код 01.02.15.625)
     Антитела к скелетным мышцам (код 01.02.15.115)
     Иммуноблот антител при полимиозите (код 01.02.15.320)
     Антитела к миелину (код 01.02.15.695)
  Аутоиммунные эндокринопатии
     Стимулирующие антитела к рецептору ТТГ (тиреотропного гормона) (код 01.02.15.270)
     Антитела к антигенам островковых клеток (GAD/IA2) (код 01.02.15.571)
     Антитела к островковым клеткам (ICA) (код 01.02.15.265)
     Антитела к инсулину, эндогенному (код 01.02.15.556)
     Антитела к глютаматдекарбоксилазе (GAD) (код 01.02.15.561)
     Антитела к тирозин-фосфатазе (IA-2) (код 01.02.15.566)
     Антитела к стероидпродуцирующим клеткам надпочечника (код 01.02.15.120)
     Антитела к стероид-продуцирующим клеткам яичка (код 01.02.15.446)
  Аутоиммунные заболевания и биопсия кожи
     Антитела к десмосомам (код 01.02.15.100)
     Антитела к базальной мембране кожи (код 01.02.15.105)
     Диагностика буллезных дерматозов (код 01.02.15.110)
     Антитела к десмоглеину-1 (код 01.02.15.590)
     Антитела к десмоглеину 3 (код 01.02.15.595)
     Антитела к белку ВР 180 (код 01.02.15.600)
     Антитела к белку ВР230 (код 01.02.15.605)
  Парапротеинемии и иммунофиксация
     Парапротеин, его свойства
     Миелома и другие парапротеинемии
     Скрининг парапротеинов (М-градиента) в сыворотке крови, иммунофиксации с поливалентной сывороткой (код 01.02.15.421)
     Иммунофиксация парапротеина (M-градиента) сыворотки крови с панелью антисывороток (IgG/A/M/E/D/k/l) (код 01.02.15.655)
     Свободные легкие цепи иммуноглобулинов при парапротеинемиях
     Диагностика амилоидоза: аспираты подкожного жира и мониторинг амилоидоза
  Биомаркеры аутоиммунных заболеваний
     Иммунные комплексы IgG, связывающие C1q
     Общая гемолитическая способность сыворотки (CH-50) (код 01.02.15.700)
     Выявление иммунокомплексной патологии (С1q-ИК и СН-50) (код 01.02.15.730)
     Ингибитор С1 эстеразы (С1INH) (код 01.02.15.705)
     Определение неоптерина в сыворотке крови (тест 01.02.15.470)
  Нейрогенетика и генетика наследственных заболеваний
     Нейрогенетика и наследственные заболевания
     Экспансионные заболевания в неврологии и экспансии нуклеотидных повторов
     Диагностика болезни Гентингтона (код 01.02.15.750)
     Гентингтоноподобные заболевания 2-го (код 01.02.15.820) и 4-го (код 01.02.15.825) типов
     Дентаторубропаллидолюисова атрофия (ДРПЛА) - (код 01.02.15.830)
     Атаксия Фридрейха (код 01.02.15.755)
     Синдром ломкой Х-хромосомы, Синдром Мартина-Белла (код 01.02.15.880)
     Синдром тремора-атаксии (код 01.02.15.880)
     Миотоническая дистрофия 1 типа (01.02.15.745)
     Миотоническая дистрофия 2 типа (код 01.02.15.740)
     Окулофарингеальная миодистрофия (код 01.02.05.255)
     Спинальная мышечная атрофия, ассоциированная с геном SMN1 (код 01.02.15.860)
     Болезнь Кеннеди (код 01.02.05.250)
     Наследственный боковой амиотрофический склероз (код 01.02.15.860)
     Наследственная периферическая невропатия Шарко-Мари-Туза (код 01.02.15.765)
     Наследственная невропатия с подверженностью параличу от сдавления (код 01.02.15.765)
     Аутосомно-доминантные спиноцеребеллярные атаксии
     Первичная дистония 1 типа (код 01.02.15.855)
     Генетические аспекты задержки развития и нарушения интеллектуальных функций (коды 01.02.05.300; 01.02.05.330; 01.02.05.295;01.02.15.880; 01.02.05.290)
     Выявление субтеломерных делеций и анеуплоидий (код 01.02.05.330)
     Моногенные причины отставания развития (код 01.02.15.880 и 01.02.05.290)
     Диагностика основных микродупликационных и микроделеционных синдромов (код теста 01.02.05.300)
     Генетика тромбофилии: выявление полиморфизмов генов F2, F5, F7, F13, FGB, ITGA2, ITGB3, PAI-1 (код 01.02.05.270)
  Диагностика нарушений обмена
     Комплекс электрофореза липидов с типированием дислипидемий
     Комплекс электрофореза липидных фракций с типированием гиперлипидемий по классификации ВОЗ (ЛПВП, ЛОНП, ЛПНП, Lp(a), хиломикроны)
     Электрофорез основных липидных фракций с расчетом содержания триглицеридов (код 01.02.15.1155)
     Электрофорез основных липидных фракций с расчетом содержания холестерина (код 01.02.15.1160)
     Генодиагностика семейной гиперхолестеринемии (ген LDLR)
     Мутации в гене PCSK9, характерные для редкой формы наследственной гиперхолестеринемии
     Выявление мутаций в гене APOB100, характерных для наследственной гиперхолестеринемии
     Комплексная диагностика семейной гиперхолестеринемии (АРОВ100, LDLR, PCSK9)
     Комплексная диагностика семейной гиперхолестеринемии (АРОВ100, LDLR, PCSK9)
     Типирование аллелей е2, е3, е4 гена АРОЕ
     Осмотическая стойкость эритроцитов для диагностики неиммунных гемолитических анемий (код 01.02.15.930)
     Электрофорез гемоглобина для диагностики гемоглобинопатий
  Онкогенетика: выявление онкогенов в материале опухолей
     Онкоген BRAF (колоректальный рак, рак легкого, меланома, рак щитовидной железы)
     Онкоген NRAS (колоректальный рак, рак щитовидной железы, меланома)
     Онкоген KRAS (колоректальный рак, рак легкого, рак щитовидной железы)
     Онкоген HRAS (рак щитовидной железы)
     Онкоген EGFR (рак легкого)
     Онкоген ALK (рак легкого)
     Онкоген ROS1 (рак легкого)
     Мутации онкогена BRCA (рак молочной железы)
     Экспрессия онкогена HER2 (рак молочно железы)
     Мутации гена c-KIT (меланома)
     Молекулярно - генетический тест определения предрасположенности: выявление микросателлитной нестабильности (MSI) (01.02.05.245)
     Выявление мутаций в цитологическом или гистологическом материале образований легкого (мутации в генах EGFR, KRAS, BRAF, HER2) ( 01.02.15.1205)
     Выявление мутаций в цитологическом и гистологическом материале при образованиях щитовидной железы (мутации в генах BRAF, TERT, KRAS, NRAS, HRAS, RET/PTC, PAX8/PPRGy) (01.02.15.1210)
     Исследование мутаций в ткани при колоректальном раке (MSI, мутации в генах KRAS, NRAS, BRAF) (01.02.15.1230)
  Диагностика рака предстательной железы (экспрессия PCA3 гена и TMPRSS2-ERG)


для медицинских работников:
подписаться на рассылку

зарегистрируйте свою электронную почту на сайте и получайте дополнительные информационные материалы по аутоиммунной диагностике


Вход на сайт
Логин:
Пароль:

зарегистрироваться вспомнить пароль


где сдать анализ крови на тест анализы спб СПб инвитро Петербург Питер на целиакию аутоиммунные заболевания аутоантитела онкогенетика онкогены онкоген аутоиммунная диагностика Лапин autoimmun антиядерные лабораторная антинуклеарный фактор антинуклеарные антитела HEp-2 тип волчанка свечения амилоидоз склеродермия иммуноблот ревматоидный цитруллиновый расшифровка экстрагируемые скрининг заболевания смешанное системная СКВ артрит дсДНК CCP ССР АЦЦП саркоидоз антинейтрофильные криоглобулины гранулематозные АНФ АНЦА ANCA ENA иммунофиксация васкулиты Крона целиакия аутоиммунный печени язвенный колит глиадину трансглутаминазе стероидпродуцируюшим Вегенера яичника эндокринопатии пузырные пузырчатка пемфигоид рассеянный склероз миастения миелина белок олигоклональный изоэлектрофокусирования IgG IgA IgM легкие цепи полиневрит ганглиозидам полимиозит парапротеин миелома неоптерин островковые GAD антимитохондриальные гладкие скелетные мышцы ASCA колит антигену фосфолипидный синдром кардиолипину фосфолипидам гликопротеину нуклеосомам SSA SSB RNP Sm CENT Scl Jo-1 АМА антикератиновые антиперинуклеарный MCV LKM-1 рецептору иммунофлюоресценция ИФА иммунологическая лаборатория университет санкт-петербург павлова Чардж-Стросса полиангиит микрокристаллические первичный билиарный цирроз трансглутаминаза трансглютаминаза критерии ревматоидного артрита 2010 года СПб Питер Петербург нейрогенетика BRCA NRAS KRAS BRAF HER2 MSI PCA3 тест мутации

Что ищут на нашем сайте:

атк деамид пептидам глиадина, антитела к фактору H норма, ss a 52, гепатит, апф, целикая, рентгенотерапия, CASPR2 anti Hu антитела, Антитела к кардиолипину IgM, СD4 CD8, Анализ на кальретикулиновую мутац, нейрофиламенты, https yandex ru search text в 20г 20Симферополь, тест рассела, колиты у детей, ATA I, Проточная цитометрия ликвора, полиневритов, ана повышен болезни, кровь на BCR, иммунология.

Системные ревматические заболевания
Классификация и методы определения АНА

Антинуклеарные (антиядерные) антитела (АНА) представляют собой семейство аутоантител, реагирующих с нуклеиновыми кислотами и ассоциированными с ними белками, включающее более 200 видов специфичных антител. С связи с многообразием этого семейства возникает очевидная проблема с номенклатурой тестов, определяющих различные представители АНА.

Антинуклеарный фактор на клеточной линии НЕр2 с определением типа свечения ядра

Под термином «антинуклеарный фактор» обычно понимают тест для выявления антинуклеарных антител с помощью метода непрямой иммунофлюоресценции. Этот тест является «золотым стандартом» диагностики, поскольку определяет максимальное количество и спектр антинуклеарных антител. Кроме того, антинуклеарный фактор указывает на распределение мишеней антинуклеарных антител в клетке (так называемый тип свечения ядра) и указывает на аффинность антител, что определяется титром. Учитывая высокую чувствительность обнаружения АНФ, нередко проводят равенство между присутствием АНА в крови больных определенными заболеваниями и положительным результатом лабораторного обследования для обнаружения АНФ. Также немаловажным является указание субстрата выявления АНФ, например, «криосрезы почки крысы» или «клеточная линия Нер-2». Это позволяет ориентироваться в диагностическом значении результата теста, так как оно в значительной мере зависит от субстрата обнаружения АНФ и исходного титра сыворотки.

Присутствие в сыворотке крови антинуклеарного фактора обуславливает обнаружение в крови клеток красной волчанки (LE-клеток). Таким образом, LE-клетки также можно рассматривать в качестве вторичного показателя, указывающего на наличие антинуклеарных антител. Низкая чувствительность и плохая воспроизводимость тестов, используемых для обнаружения LE-клеток, не позволяет им на равных конкурировать с АНФ, и в настоящее время анализ на LE-клетки постепенно вытесняется серологическими методами обнаружения АНА.

Всеми действующими группами экспертов, в том числе группой по исследованию антинуклеарных антител Американского колледжа ревматологов (ACR ANA Task Force) и экспертами Европейской инициативы по стандартизации тестов в аутоиммунных заболеваниях - European Autoimmunity standartization Initiative (EASI), настойчиво рекомендуется использовать антинуклеарный фактор в качестве основного метода скрининга антинуклеарных антител (тест 01.02.15.005).

 

Голландские рекомендации по выявлению антинуклеарных антител в диагностических лабораториях (Dutch EASI Group, 2010)

  1. Выявление антинуклеарного фактора на клеточной линии НЕр-2 с помощью нРИФ является основным методом выявления АНА;
  2. Рекомендуем закрепить за термином АНФ только тесты нРИФ, для ИФА тестов использовать другую аббревиатуру (АНА или ЕНА-скрин);
  3. Положительные результаты АНФ необходимо указывать в виде титров;
  4. Необходимо определять тип свечения ядра;
  5. Антитела к двуспиральной ДНК (дсДНК) должны указываться количественно, указывать метод выявления;
  6. Необходимо определять как минимум следующие 7 специфичностей ЭНА: SSA, SSB, Sm, RNP, CENTB, Scl-70, Jo-1 (иммуноблот АНА);
  7. Необходимо отдельно выявлять SSA60 кДа и 52 кДа;
  8. При подозрении на врожденную волчанку выявлять анти-SSA52 кДа;
  9. Тесты должны выявлять SmD антиген;
  10. Антитела к дсДНК должны быть доступны 24/7 (быстрый тест);
  11. При выявлении гомогенного типа свечения – тестирование на анти- дсДНК;
  12. При положительных результатах АНА необходимо выявлять специфичности АНА (иммуноблот АНА);
  13. При синдроме Шегрена, полимиозите и врожденной волчанке всегда выявлять антитела к экстрагируемым ядерным антигенам (ЭНА).
 

Антиядерные (антинуклеарные) антитела и антитела к экстрагируемому ядерному антигену

Эта группа тестов представляет собой антитела к водорастворимым компонентам ядра клетки. Под названием extractible nuclear antigen (ENA) – "экстрагируемый нуклеарный (ядерный) антиген» (ЭНА/ENA) понимают фракцию растворимых ядерных белков, которые могут быть получены из ядра клетки. В ее состав входит 6 основных рибонуклеопротеиновых антигенов АНА, таких как SSA, SSB, Sm, U1-RNP, Scl-70 и Jo-1, а также ряд других минорных антигенов. Первоначально для этого теста использовался ацетонный экстракт тканей лабораторных животных, например, тимуса кролика, который содержал максимальное количество нуклеиновых и рибонуклеиновых антигенов. В настоящее время при выявлении антиядерных антител обычно используется смесь антигенов, некоторые из них синтезируют с помощью рекомбинантной технологии, некоторые выделяют из ткани.

Выявлением антител к ЭНА/ENA называют определение специфичностей антинуклеарных антител (см. ниже), направленных на конкретные антигены. В данном случае, спектр антигенов ENA пространственно разделен, и тестирование происходит с конкретными антигенами. Такое разделение достигается при нанесении очищенных антигенов в разные лунки иммуноферментного планшета (ИФА) или нанесение на разные части нитроцеллюлозной мембраны (иммуноблот).При использованиив лабораторных тестах смеси антигенов, эти методы обычно называют ЭНА-скрин (ENA-screen) или АНА-скрин (ANA-screen) соответственно.

При использовании в лабораторных тестах смеси антигенов, эти методы обычно называют ЭНА-скрин (ENA-screen) или АНА-скрин (ANA-screen) при выявлении антител к экстрагируемым ядерным антигенам или антинуклеарных антител, соответственно.

Существует две основные разновидности ИФА для скринингового обнаружения антител к ЭНА. В одном случае в лунку наносится тотальный ядерный экстракт, а в другом - смесь рекомбинантных очищенных белков, представляющих основные разновидности рибонуклеопротеиновых антигенов. Использование смеси рекомбинантных белков делает обследование более специфичным и улучшает стандартизацию выявления аутоантител. В то же время, далеко не все антигены АНА могут быть нанесены на ИФА планшет, в результате чего комбинированные тесты пропускают до 40-60% антинуклеарных антител, выявляемых с помощью антинуклеарного фактора.

В скрининговых методах смесь антигенов вносится в лунку планшета для иммуноферментного анализа (ИФА) или используется в автоматизированных тестах для обнаружения антинуклеарных (антиядерных) антител. Несмотря на сравнительную быстроту и удобство, эти методы значительно уступают антинуклеарному фактору, так как упускают до 20% положительных результатов, кроме того, возрастает частота ложноположительных реакций. Это происходит в силу ряда причин:

  1. Спектр исследуемых антигенов не превышает 6-10;
  2. Отсутствуют конформационные и лабильные антигены;
  3. В смеси антигенов образуется множество неоэпитопов;
  4. Одни антигены блокируют другие антигены;
  5. Сорбция антигенов на подложку неравномерна, заряженные антигены сорбируются;
  6. При рекомбинантном синтезе и очистке меняется структура большинства антигенов;
  7. Возможны реакции с блокирующим веществом.

В то же время, потребность в большей автоматизации лабораторного процесса привела к тому, что появляется все больше новых методов для выявления антинуклеарных антител, альтернативных процессу выявления антинуклеарного фактора. Более 10 лет назад появились первые наборы для определения АНА с помощью ручного метода ИФА, основанные на смеси очищенных и рекомбинантных антигенов ЭНА. В настоящее время ведущими мировыми производителями лабораторного оборудования создаются автоматизированные полузакрытые и закрытые системы, принцип работы которых основывается на различных методах: методе твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА), хемилюминесцентного метода, технологии мультиплексного анализа.

Основные производители автоматизированных систем для выявления антиядерных антител и используемые методы.

Фирма-производитель

Система реактивов /прибор

Метод

Orgentec, Германия

Alegria

ИФА

Phadia, Швеция

EliA/Phadia

Хемилюминисцентный метод

Diasorin, Италия

Liaison

Хемилюминисцентный метод

Zeus Scientific, США

AtheNA Multi-Lyte/Luminex

Мультиплексный анализ

 

Внедрение представленных современных автоматизированных систем ставит вопрос о целесообразности сохранения АНФ в качестве основного метода диагностики АНА. Для выработки рекомендаций по этой проблеме действует несколько европейских и американских групп экспертов, таких, как ANA Task Forcе Американского колледжа ревматологов и European Autoimmunity Standartization Initiative (EASI). Большинство экспертов сходятся во мнении, что определение антинуклеарных антител методом АНФ на клетках Нер-2 с помощью непрямой иммунофлюоресценции является первостепенным в диагностике системной аутоиммунной патологии. Если же для диагностики АНА используется другой лабораторный метод, то диагностические лаборатории должны указывать, каким методом исследуются антинуклеарные антитела. Кроме того, диагностические лаборатории должны указывать специфичность и чувствительность используемого метода выявления антинуклеарных/антиядерных/анти-ЭНА антител по сравнению с АНФ.

Со своей стороны рекомендуем использовать обнаружение антител к ЭНА-скрин (АНА-скрин) в качестве дополнительного метода при сопутствующем выявлении антинуклеарного фактора. Скрининг болезней соединительной ткани  (тест 01.02.15.245) позволяет не пропустить редкие случаи «АНФ-негативной СКВ» и другие заболевания, сопровождающиеся высокорастворимыми антигенами, такими как SSA антиген. Отрицательный результат такого теста позволяет исключить диагноз системного ревматического заболевания с вероятностью 95-98%, что позволяет широко использовать его в целях скрининга и дифференциальной диагностике.

Таким образом, иммунохимические тесты по выявлению антиядерных (антинуклеарных) антител должны использоваться только совместно с антинуклеарным фактором. При использовании иммунохимических методов в качестве единственного метода выявления АНА наблюдается высокая частота ложноотрицательных результатов обследования (Bossuytetal. Ann Rheum Dis 2008) и ошибочное исключение диагноза аутоиммунного заболевания. В частности, методы скринингового определения антинуклеарных антител оказываются бессильны при аутоиммунных заболеваниях печени, ювенильном ревматоидном артрите и ряде других аутоиммунных заболеваний, поскольку не содержат соответствующих антигенов антинуклеарных антител.

Нуклеиновые кислоты (ДНК, РНК) водонерастворимы и отрицательно заряжены, поэтому в состав экстрагируемых ядерных антител не входят. Для их выявления необходимо использовать антинуклеарный фактор и другие подтверждающие тесты (антитела к дсДНК методом ИФА, тест 01.02.15.125).

В то же время, выявление антител к ЭНА в скрининговом тесте представляет собой отдельный показатель (тест 01.02.15.160), обычно определяемый с помощью метода ИФА. Его использование наряду с определение АНФ позволяет уточнить присутствие в исследуемой сыворотке антител к хорошо растворимым конформационным антигенам, прежде всего SS-A, которые могут утрачиваться в ходе фиксации клеток перевиваемых клеточных линий.

Определение специфичности антинуклеарных антител

Под определением «специфичность антинуклеарных антител» понимают выявление конкретного антигена, к которому направлены АНА. Номенклатура конкретных разновидностей АНА зависит как от ядерных мишеней аутоантител, так и от методов, с помощью которых они обнаруживаются. Отдельно выделяют: АНА, реагирующие с нуклеиновыми кислотами, прежде всего ДНК; антитела к водорастворимым антигенам, которые могут быть экстрагированы водно-солевыми растворами; антитела к экстрагируемому ядерному антигену (ЭНА); антитела к нерастворимым в воде антигенам; а также к конформационным антигенам, которые разрушаются при препаративном выделении из ядра клетки. Два последних вида аутоантигенов не могут быть получены в очищенном виде, поэтому единственным объективным методом их обнаружения является АНФ с описанием типа свечения ядра клетки. Хотя большинство белков, которые используются в коммерческих наборах для выявления АНА, являются рекомбинантными и уже не экстрагируются из ядер клеток, конкретные разновидности белковых антигенов АНА продолжают называть общим термином «экстрагируемый нуклеарный антиген» (ЭНА) - extractible nuclear antigen (ENA). Иногда исследование специфичностей антинуклеарных антител называют «определение антител к ЭНА». Для определения специфичностей антинуклеарных антител в нашей лаборатории используется иммуноблот антинуклеарных антител (тест 01.02.15.165).

Уточнение антигенных мишеней АНА зависит от антигенного субстрата, который применяется в иммунологических тестах. Антиген-содержащий субстрат может быть нативным, то есть полученным при минимальной очистке, либо высокоочищенным из ткани с помощью биохимических методов. Кроме того, белки-антигены могут быть получены методами генной инженерии или синтезированы химически методами пептидного синтеза. Использование того или другого метода очистки и синтеза аутоантигена зависит, прежде всего, от его биохимической природы и особенностей связывания с ним аутоантител. Рекомбинантные белки и синтетические пептиды более удобны в работе, так как методы их получения легко стандартизируются. Однако, чем менее очищен антиген, тем более он сохраняет свою третичную структуру, таким образом взаимодействие с аутоантителом более приближено к условиям взаимодействия in vivo.

Аутоантитела против внутриклеточных антигенов, открытые на стыке клинической иммунологии и молекулярной биологии, способствовали процессу постижения функционирования клеточных структур. Описание антинуклеарных антител активно продолжается в настоящее время одновременно с совершенствованием лабораторных техник и углублением фундаментальных познаний о строении клетки. Большинство видов АНА направлены к сложным комплексам рибонуклеиновых кислот и белков. Изучение антинуклеарных антител зачастую опережало открытие функциональных белков и рибопротеиновых комплексов, что привело к возникновению двойной номенклатуры при описании некоторых видов АНА, включающей как общепринятое название аутоантитела, так и указание конкретного ядерного белка. Обычно тип антинуклеарных антител получал название, в основе которого лежит имя пациента, у которого эта разновидность АНА была впервые обнаружена. В основе более современной номенклатуры лежат клеточные мишени аутоантител, с которыми они взаимодействуют.

Таким образом, номенклатура аутоантигенов может строиться на основе следующей информации:

Например, антитела к антигену Ro/SS-A (Ro по фамилии больного Robair /SS-A - Sjogren’s syndrome A antigen), направлены против белков массой 52 кДа и 60 кДа, связанных с Y1-Y5 РНК в составе сплайсосомы, а антитела к антигену La/SS-B (по больному Lapiere/Sjogren’s syndrome B antigen) направлены против белка, связанного с РНК полимеразой 3. Номенклатура аутоантител, основанная на фамилиях пациентов, постепенно уходит в прошлое, а в современной литературе превалирует название антигенов с указанием молекулярной массы, например, SS-A антиген молекулярной массой 52 и 60 кДа.

Возможна ситуация, при которой указывается конкретная клеточная мишень аутоантител. Так, антитела, направленные против ядерного антигена пролиферирующих клеток, получили название по имени белка, с которым они реагируют, - PCNA 1 (proliferating cell nuclear antigen 1). Разновидность АНА может получить название в соответствии с молекулярной массой белка, с которым оно взаимодействует, например, аутоантитела анти-р80 направлены к белку массой 80 кДа. Последующие исследования установили точную клеточную мишень, как, например, для анти-р80 антител это белок койлин. У больных со склеродермией были обнаружены антитела, направленные на антиген массой 70 кДа и получившие название Scl-70. Позднее было установлено, что мишенью Scl-70 - антител является топоизомераза 1, точнее, ее иммунодоминантный эпитоп, получивший название TOPO-1.

Может сложиться ситуация, когда в одной сыворотке могут быть одновременно обнаружены антитела разных специфичностей, направленные к нескольким антинуклеарным антигенам. Некоторые антитела часто отмечаются совместно – например, антитела к SS-Aи SS-B, либо U1-RNP и Sm антигенам. Эти ассоциации обусловлены тем, что антигены входят в состав одного белкового комплекса, с которым реагируют аутоантитела. Некоторые разновидности АНА могут часто отмечаться совместно за счет того, что они встречаются при одном заболевании или при перекрестных синдромах.

Клиническое значение определения специфичности основных разновидностей антинуклеарных антител приведено в описании соответствующих тестов.

Антитела к двуспиральной (нативной) ДНК

Антитела к двуспиральной ДНК (дсДНК) играют большую роль в диагностике и мониторинге больных с системной красной волчанкой, однако их выявление имеет ряд особенностей. Для детекции антител к дсДНК методом иммуноферментного анализа сложно сохранить нативную структуру молекулы.  Так, молекула дсДНК несет значительный отрицательный заряд и не может быть непосредственно нанесена на отрицательно заряженный пластик иммуноферментного планшета. Для того, чтобы сорбировать дсДНК на дне лунок планшета, необходимо использовать положительно заряженные вещества-линкеры. Часто использование УФ-облучения планшетов или использование чужеродных белков (например, протамина) приводит к деспирализации дсДНК с образованием значительного числа односпиральных молекул и снижению специфичности обследования. В результате, большинство твердофазных иммуноферментных систем первого поколения для обнаружения антител к дсДНК оказываются относительно неспецифичными. Практическим ревматологам необходимо знать об этой особенности выявления антител к дсДНК и с осторожностью интерпретировать низкие титры этого показателя. Для выявления антител к дсДНК рекомендуется использовать тест-системы второго поколения, обладающие улучшенными клинико-лабораторными параметрами.

Друзья:

VIMANA.su уфология и палеоконтакт
Мини-юбка.ru