как нас найти          о лаборатории          направление и прейскурант СПбГМУ          Публикации          Вакансии          Задать вопрос!          полезные ссылки          

  Аутоиммунные заболевания
     Аутоиммунные заболевания, определение
     Аутоиммунные заболевания, эпидемиология
     Аутоантитела при аутоиммунных процессах
     Аутоиммунные заболевания, диагностика
     Клиническая лабораторная эпидемиология
  Системные ревматические заболевания
     Антинуклеарные антитела (АНА)
     Классификация и методы определения АНА
     Антинуклеарный фактор (АНФ) и тип свечения
     Антинуклеарный фактор на клеточной линии HEp-2 (код 01.02.15.005)
     Антитела к экстрагируемому нуклеарному антигену ENA (код 01.02.15.160)
     Скрининг болезней соединительной ткани (код 01.02.15.245)
     Антитела к двуспиральной дсДНК (дсДНК-NcX), тест второго поколения (тест 01.02.15.125)
     Антитела к нуклеосомам, тест второго поколения (код 01.02.15.425)
     Обследование при СКВ (системной красной волчанке) код 01.02.15.230
     Дифференциальная диагностика СКВ и других ревматических заболеваний (код 01.02.15.430)
     Иммуноблот антинуклеарных антител (код 01.02.15.165)
     Иммуноблот антинуклеарных антител при склеродермии (код 01.02.15.535)
  Ревматоидный артрит и артропатии
     Диагностика ревматоидного артрита, критерии
     Диагностика ювенильного артрита
     Диагноз серонегативных артропатий
     АЦЦП анализ: Антитела к циклическому цитруллиновому пептиду, АЦЦП/ССP/ACPA (код 01.02.15.080)
     Антитела к модифицированному цитруллинированному виментину), АМЦВ/ MCV (код 01.02.15.405)
     Ревматоидный фактор (РФ), общее содержание (код 01.02.15.405)
     Антикератиновые антитела, АКА (код 01.02.15.065)
     Ревматоидный фактор класса IgA (код 01.02.15.585)
     Скрининг ревматоидного артрита (код 01.02.15.410)
     Типирование гена HLA B27 (код 01.02.15.530)
     Кристаллы в синовиальной жидкости: диагностика микрокристаллических артопатий (код 01.02.15.385)
  Антифосфолипидный синдром (АФС), патогенез и диагностика
     Критерии диагностики антифосфолипидного синдрома
     Антитела к кардиолипину (АКЛА) классов IgG и IgM (код 01.02.15.145)
     Антитела к бета-2 гликопротеину (код 01.02.15.225)
     Антитела к фосфатидилсерину-протромбину (PS-PT) код 01.02.15.615
     Антитела к аннексину V (А5), классов IgG и IgM
     Антитела к тромбоцитам класса IgG
     Иммуноблот антифосфолипидных антител IgG/IgM (код 01.02.15.875)
  Диагностика васкулитов и поражения почек, Антитела к цитоплазме нейтрофилов
     Классификация первичных васкулитов
     Диагностика васкулитов крупных сосудов
     Диагностика гранулематозных васкулитов
     Диагноз иммунокомплексных васкулитов
     Антинейтрофильные цитоплазматические антитела (АНЦА/ANCA) класса IgG (код 01.02.15.010)
     Антитела к эндотелию на клетках HUVEC (код 01.02.15.395)
     Антитела к протеиназе 3 (ПР-3/PR-3) класса IgG, код 01.02.15.140
     Антитела к миелопероксидазе (МПО), код 01.02.15.135
     Антитела к антигенам антинейтрофильных антител ANCA-панель (код 01.02.15.415)
     Диагностика гранулематозных васкулитов (код 01.02.15.035)
     Антитела к базальной мембране клубочка (код 01.02.15.085)
     Диагностика быстропрогрессирующего гломерулонефрита (код 01.02.15.090)
     Антитела к C1q фактору комплемента (код 01.02.15.365)
     Антитела к рецептору фосфолипазы А2 (PLA2R), диагностика мембранозного гломерулонефрита
     Антинейтрофильные антитела
  Аутоиммунные заболевания легких и сердца
     Активность АПФ (Ангиотензин-превращающий фермента), диагностика саркоидоза, код 01.02.15.370)
     Неоптерин в сыворотке крови (код 01.02.15.470)
     Антитела к миокарду (код 01.02.15.170)
     Диагностика воспалительных миокардиопатий (код 01.02.15.335)
  Аутоиммунные заболевания печени
     Антитела к гладким мышцам (F-актину), код 01.02.15.040
     Антитела к микросомам печени почек, LKM-1 (код 01.02.15.045)
     Антитела к митохондриям АМА (М1-М9), код 01.02.15.045
     Антитела к асиалогликопротеиновому рецептору (anti-ASGPR) класса IgG (01.02.15.635)
     Скрининг аутоиммунного поражения печени (01.02.15.060)
     Иммуноблот аутоантител при аутоиммунных заболеваниях печени (код 01.02.15.306)
     Развернутая серология аутоиммунных заболеваний печени
  Целиакия лабораторная диагностика, анализы у детей и взрослых
     Целиакия (глютеновая энтеропатия), определение и история описания
     Генетика целиакии - типирование HLA-DQ2 и HLA-DQ8 (тест 01.02.15.431) для определения риска целиакии
     Антитела к тканевой трансглютаминазе (ТТГ) класса IgA (TG2) код 01.02.15.190
     Антитела к тканевой трансглютаминазе класса IgG (код 01.02.15.185)
     Антитела к глиадину (дезаминированные пептиды глиадина) класса IgG (код 01.02.15.175)
     Морфология и клинические проявлении целиакии
     Распространенность и эпидемиология целиакии
     Антитела и критерии диагностики целиакии
     Антитела к эндомизию IgA (код 01.02.15.195)
     Антитела к дезамидированным пептидам глиадина (ДПГ) класса IgA (код 01.02.15.180)
     Антитела к ретикулину классов IgA и IgG (код 01.02.15.200)
     Скрининг целиакии (код 01.02.15.211)
     Серологическая диагностика (уточнение диагноза) целиакии (код 01.02.15.215)
     Полное обследование при целиакии, развернутая серология (код 01.02.15.221)
     Диагностика целиакия без боли у детей и взрослых
  Аутоиммунный гастрит и лактазная недостаточность
     Антитела к обкладочным (париетальным) клеткам желудка (код 01.02.15.050)
     Антитела к внутреннему фактору (фактору Кастла), код 01.02.15.545
     Диагностика аутоиммунного гастрита и пернициозной анемии (код 01.02.15.610)
     Альфа 1-антитрипсин в стуле, кишечная потеря белка
  Поражения ЖКТ, болезнь Крона, язвенный колит и аутоиммунный панкреатит
     Аутоиммунные заболевания и онкологические заболевания ЖКТ
     Скрытая кровь в стуле (FOB) в диагностике колоректального рака
     НПВС энтеропатия и фекальные биомаркеры
     Кальпротектин фекальный и другие биомаркеры воспаления при ВЗК
     Фекальный кальпротектин (код 01.02.15.550)
     Гемоглобин в стуле - FOBT (код 01.02.15.720)
     Скрининг заболеваний желудочно-кишечного тракта - FOBT и кальпротектин (код 01.02.15.735)
     Антитела к Saccharomyces cerevisiae (ASCA) и другие антигликановые антитела
     Антинейтрофильные цитоплазматические антитела (АНЦА) при ВЗК
     ASCA анализ: Антитела к сахаромицетам класса IgG (код 01.02.15.250)
     Антитинейтрофильные цитоплазматические антитела (АНЦА) класса IgA (код 01.02.15.460)
     Диагностики болезни Крона и язвенного колита (код 01.02.15.256)
     Антитела к бокаловидным клеткам кишечника
     Антитела к экзокринной части поджелудочной железы
     Антитела к GP2 антигену классов IgG и IgA
     IgG4-ассоциированный аутоиммунный панкреатит
     IgG4-ассоциированные заболевания: панкреатит, сухой синдром, ретроперитонеальный фиброз (болезнь Ормонда), тиреоидит (болезнь Риделя)
     Иммуноглобулин подкласс IgG4, диагностика аутоиммунного панкреатита (код 01.02.15.540)
  Аутоиммунные неврологические заболевания
     Олигоклональный иммуноглобулин IgG в ликворе и сыворотке крови (код 01.02.15.155)
     Антитела к аквапорину 4, диагностика оптиконевромиелита (болезни Девика) код 01.02.15.575
     Антитела к NMDA глютаматному рецептору
     Антинейрональные антитела, иммуноблот (код 01.02.15.400)
     Антитела к ганглиозидам, иммуноблот (код 01.02.15.620)
     Антитела к ацетилхолиновым рецепторам, АхР, AchR (код 01.02.15.625)
     Антитела к скелетным мышцам (код 01.02.15.115)
     Иммуноблот антител при полимиозите (код 01.02.15.320)
     Антитела к миелину (код 01.02.15.695)
  Аутоиммунные эндокринопатии
     Стимулирующие антитела к рецептору ТТГ (тиреотропного гормона), код 01.02.15.270
     Антитела к антигенам островковых клеток (GAD/IA2), код 01.02.15.570
     Антитела к островковым клеткам (ICA) код 01.02.15.570
     Антитела к инсулину, эндогенному (код 01.02.15.555)
     Антитела к глютаматдекарбоксилазе (GAD), код 01.02.15.560
     Антитела к тирозин-фосфатазе (IA-2), код 01.02.15.565
     Антитела к стероидпродуцирующим клеткам надпочечника (код 01.02.15.120)
     Антитела к стероид-продуцирующим клеткам яичка (код 01.02.15.445)
  Аутоиммунные заболевания и биопсия кожи
     Антитела к десмосомам (код 01.02.15.100)
     Антитела к базальной мембране кожи (код 01.02.15.105)
     Диагностика буллезных дерматозов (код 01.02.15.110)
     Антитела к десмоглеину-1 (код 01.02.15.590)
     Антитела к десмоглеину 3 (код 01.02.15.595)
     Антитела к белку ВР 180 (код 01.02.15.600)
     Антитела к белку ВР230 (код 01.02.15.605)
  Парапротеинемии и иммунофиксация
     Парапротеин, его свойства
     Миелома и другие парапротеинемии
     Скрининг парапротеинов (М-градиента) в сыворотке крови, иммунофиксации с поливалентной сывороткой (код 01.02.15.420)
     Иммунофиксация парапротеина (M-градиента) сыворотки крови с панелью антисывороток (IgG/A/M/E/D/k/l), код 01.02.15.655
     Свободные легкие цепи иммуноглобулинов при парапротеинемиях
     Диагностика амилоидоза: аспираты подкожного жира и мониторинг амилоидоза
  Биомаркеры аутоиммунных заболеваний
     Иммунные комплексы IgG, связывающие C1q
     Общая гемолитическая способность сыворотки (CH-50)
     Выявление иммунокомплексной патологии (С1q-ИК и СН-50)
     Ингибитор С1 эстеразы (С1INH)
     Определение неоптерина в сыворотке крови (тест 01.02.15.470)
  Генетика неврологических заболеваний (Нейрогенетика)
     Генодиагностика наследственных заболеваний
     Нейрогенетика, основные определения
     Экспансионные заболевания в неврологии и экспансии нуклеотидных повторов
     Диагностика болезни Гентингтона (код 01.02.15.750)
     Гентингтоноподобные заболевания 2-го (код 01.02.15.820) и 4-го (код 01.02.15.825) типов
     Дентаторубропаллидолюисова атрофия (ДРПЛА) - (код 01.02.15.830)
     Синдром ломкой Х-хромосомы, Синдром Мартина-Белла (код 01.02.15.880)
     Атаксия Фридрейха (код 01.02.15.755)
     Синдром тремора-атаксии (код 01.02.15.880)
     Миотоническая дистрофия 1 типа (01.02.15.745)
     Миотоническая дистрофия 2 типа (код 01.02.15.740)
     Окулофарингеальная миодистрофия (код 01.02.15.255)
     Спинальная мышечная атрофия, ассоциированная с геном SMN1 (код 01.02.15.860)
     Болезнь Кеннеди (код 01.02.05.250)
     Наследственный боковой амиотрофический склероз (код 01.02.15.860)
     Наследственная периферическая невропатия Шарко-Мари-Туза (код 01.02.15.765)
     Наследственная невропатия с подверженностью параличу от сдавления (код 01.02.15.765)
     Аутосомно-доминантные спиноцеребеллярные атаксии
     Первичная дистония 1 типа (код 01.02.15.855)


для медицинских работников:
подписаться на рассылку

зарегистрируйте свою электронную почту на сайте и получайте дополнительные информационные материалы по аутоиммунной диагностике


Вход на сайт
Логин:
Пароль:

зарегистрироваться вспомнить пароль


где сдать анализ крови на тест анализы спб СПб инвитро Петербург Питер на целиакию аутоиммунные заболевания аутоантитела аутоиммунная диагностика Лапин autoimmun антиядерные лабораторная антинуклеарный фактор антинуклеарные антитела HEp-2 тип волчанка свечения амилоидоз склеродермия иммуноблот ревматоидный цитруллиновый расшифровка экстрагируемые скрининг заболевания смешанное системная СКВ артрит дсДНК CCP ССР АЦЦП саркоидоз антинейтрофильные криоглобулины гранулематозные АНФ АНЦА ANCA ENA иммунофиксация васкулиты Крона целиакия аутоиммунный печени язвенный колит глиадину трансглутаминазе стероидпродуцируюшим Вегенера яичника эндокринопатии пузырные пузырчатка пемфигоид рассеянный склероз миастения миелина белок олигоклональный изоэлектрофокусирования IgG IgA IgM легкие цепи полиневрит ганглиозидам полимиозит парапротеин миелома неоптерин островковые GAD антимитохондриальные гладкие скелетные мышцы ASCA колит антигену фосфолипидный синдром кардиолипину фосфолипидам гликопротеину нуклеосомам SSA SSB RNP Sm CENT Scl Jo-1 АМА антикератиновые антиперинуклеарный MCV LKM-1 рецептору иммунофлюоресценция ИФА иммунологическая лаборатория университет санкт-петербург павлова Чардж-Стросса полиангиит микрокристаллические первичный билиарный цирроз трансглутаминаза трансглютаминаза критерии ревматоидного артрита 2010 года СПб Питер Петербург нейрогенетика

Что ищут на нашем сайте:

АНТИТЕЛА К АЦЕТИЛХОЛИНОВЫМ РЕЦЕПТ, анализ на уровень прокальцитонина, болезнь крона, подкласс IgG4, клиника аутоиммунных заболеваний, кальпротектин фекальный, тромбоцит, Набор для АНФ ImmuGlo Hep 2 Cells Anti Nuclear Anti, миастения, целиакия, криофибриногенемия, Хошимото, SRP, лечение микроскопического полианг, антитела к цитоплазматическому аг, анти БМК, Типирование HLA DQ2 DQ8, КОД 01 02 15 040, Метод определения апоптоза в коже, тест 01 02 15 315, иммунология.

Системные ревматические заболевания
Классификация и методы определения АНА

Антинуклеарные антитела (АНА) представляют собой  семейство аутоантител, реагирующих с нуклеиновыми кислотами и ассоциированными с ними белками, которое насчитывает более 200 антигенных специфичностей. С связи с многообразием этого семейства аутоантител возникает очевидная проблема с номенклатурой тестов, определяющих различные представители АНА. Антинуклеарные антитела и антиядерные антитела это одно и то же.

Антинуклеарный фактор на клеточной линии НЕр2 с определением типа свечения ядра

Под термином «антинуклеарный фактор» обычно понимают тест для выявления антинуклеарных антител с помощью метода непрямой иммунофлюоресценции. Этот тест является «золотым стандартом» диагностики, поскольку определяет максимальное количество и спектр антинуклеарных антител. Кроме того, антинуклеарный фактор указывает на распределение мишени антинуклеарных антител в клетке (так называемый тип свечения ядра) и указывает на аффинность антител, что определяется титром. Учитывая высокую чувствительность обнаружения АНФ, нередко поводят равенство между присутствием АНА в крови больных определенными заболеваниями и положительным результатом лабораторного обследования для обнаружения АНФ. Также немаловажно указывать субстрат выявления АНФ, например «криосрезы почки крысы» или «клеточная линия Нер-2». Это позволяет сориентироваться  в диагностическом значении результата теста, так как оно в значительной мере зависит от субстрата обнаружения АНФ и исходного титра сыворотки.

Присутствие в сыворотке крови АНФ обуславливает обнаружение в крови клеток красной волчанки (LE-клеток). Таким образом, LE-клетки также можно рассматривать в качестве вторичного показателя указывающего на наличие АНА. Низкая чувствительность и плохая воспроизводимость тестов, используемых для обнаружения LE-клеток, не позволяет им на равных конкурировать с АНФ и постепенно LE-клетки полностью вытесняются серологическими методами обнаружения АНА.

Всем действующими группами экспертов, в том числе группой по исследованию антинуклеарных антител Американского колледжа ревматологов (ACR ANA Task Force) и экспертами Европейской инициативы по стандартизации тестов в аутоиммунных заболеваниях - European Autoimmunity standartization Initiative (EASI) настойчиво рекомендуется использовать антинуклеарный фактор в качестве основного метода скрининга антинуклеарных антител (тест 01.02.15.005).

Голландские рекомендации по выявлению антинуклеарных антител в диагностических лабораториях (Dutch EASI Group, 2010)

  1. Выявление антинуклеарного фактора на клеточной линии НЕр-2 с помощью нРИФ является основным методом выявления АНА
  2. Рекомендуем закрепить за термином АНФ только тесты нРИФ, для ИФА тестов использовать другую аббревиатуру (АНА или ЕНА-скрин)
  3. Положительные результаты АНФ необходимо указывать в виде титров
  4. Необходимо определять тип свечения ядра
  5. Антитела к дсДНК должны указываться количественно, указать метод выявления
  6. Необходимо определять как минимум следующие 7 специфичностей ЭНА: SSA, SSB, Sm, RNP, CENTB, Scl-70, Jo-1 (иммуноблот АНА)
  7. Необходимо отдельно выявлять SSA60 кДа и 52 кДа
  8. При подозрение на врожденную волчанку выявлять анти-SSA52 кДа
  9. Тесты должны выявлять SmDантиген
  10. Антитела к дсДНК должны быть доступны 24/7 быстрый тест
  11. При выявлении гомогенного типа свечения – тестирование на анти- дсДНК
  12. При положительных результатах АНА необходимо выявлять специфичности АНА (иммуноблот АНА)
  13. При с.Шегрена, полимиозите и врожденной волчанке всегда выявлять ЭНА
 

 

Антиядерные ( антинуклеарные )антитела и антитела к экстрагируемому ядерному антигену

Эти группа тестов представляет собой антитела к водорастворимым компонентам ядра клетки. Под названием extractible nuclear antigen (ENA) – "экстрагируемый нуклеарный (ядерный) антиген» (ЭНА/ENA) понимают фракцию растворимых ядерных белков, которые могут быть получены из ядра клетки. В его состав входит 6 основных рибонуклеопротеиновых антигенов АНА, таких как SSA, SSB, Sm, U1-RNP, Scl-70 и Jo-1, а также ряд других минорных антигенов. Изначально использовался ацетонный экстракт тканей лабораторных животных, например тимуса кролика, который содержал максимальное количество нуклеиновых и рибонуклеиновых антигенов. В настоящее время при выявлении антиядерных антител обычно используется смесь антигенов, некоторые из них синтезируют с помощью рекомбинантной технологии, некоторые выделяют из ткани.

Выявлением антител к ЭНА/ENA называют определение специфичностей антинуклеарных антител (см.ниже), направленных на конкретные антигены антинуклеарных антител. В этом случае, спектр антигенов ENA пространственно разделен и тестирование происходит с конкретными антигенами. Такое разделение антигенов достигается при нанесении очищенных антигенов в разные лунки иммуноферментного планшета (ИФА) или нанесение на разные части нитроцеллюлезной мембраны (иммуноблот).

При использованиив лабораторных тестах смеси антигенов, эти методы обычно называют ЭНА-скрин (ENA-screen) или АНА-скрин (ANA-screen) соответственно.

Существует две основные разновидности ИФА для скринингового обнаружения антител к ЭНА. В одном случае в лунку наносится тотальных ядерный экстракт, а в другом смесь рекомбинантных очищенных белков, представляющие основные разновидности рибонуклеопротеиновых антигенов. Использование смеси рекомбинантных белков делает обследование более специфичным и улучшает стандартизацию выявления аутоантител. В то же время, далеко не все антигены АНА могут быть нанесены на ИФА планшет, в результате чего комбинированные тесты пропускают до 40-60% антинуклеарных антител, выявляемых с помощью антинуклеарного фактора.

В скрининговых методах смесь антигенов внесена в лунку планшета для иммуноферментного анализа (ИФА) или используется в автоматизированных тестах для обнаружения антинуклеарных (антиядерных) антител. Несмотря на сравнительную быстроту и удобство эти методы значительно уступают антинуклеарному фактору, так как упускают до 20% положительных результатов, кроме того возрастает частота ложно-положительных реакций. Это происходит в силу ряда причин:

1.       Спектр исследуемых антигенов не превышает 6-10;

2.       Отсутствуют конформационные и лабильные антигены;

3.       В смеси антигенов образуется множество неоэпитопов;

4.       Одни антигены блокируют другие антигены;

5.       Сорбция антигенов на подложку неравномерна, заряженные антигены сорбируются;

6.       При рекомбинантном синтезе и очистке меняется структура большинства антигенов;

7.       Возможны реакции с блокирующим веществом.

В то же время, потребность в большей автоматизации лабораторного процесса привела к тому, что появляется все больше новых для выявления антинуклеарных антител, альтернативных выявления антинуклеарного фактора. Более 10 лет назад появились первые наборы для определения АНА с помощью ручного метода ИФА, основанные на смеси очищенных и рекомбинантных антигенов ЭНА. В настоящее время ведущими мировыми производителями лабораторного оборудования создаются автоматизированные полузакрытые и закрытые системы, принцип работы которых основывается на различных методах: методе твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА), хемилюминисцентного метода, технология мультиплексного анализа.

Основные производители автоматизированных систем для выявления антиядерных антител и используемые методы.

Фирма-производитель

Система реактивов /прибор

Метод

Orgentec, Германия

Alegria

ИФА

Phadia, Швеция

EliA/Phadia

Хемилюминисцентный метод

Diasorin, Италия

Liaison

Хемилюминисцентный метод

Zeus Scientific, США

AtheNA Multi-Lyte/Luminex

Мультиплексный анализ

 

Внедрение представленных современных автоматизированных систем ставит вопрос о целесообразности сохранения АНФ в качестве основного метода диагностики АНА. Для выработке рекомендаций по этой проблеме действует несколько европейских и американских групп экспертов, таких как, ANA Task Forcе Американского колледжа ревматологов и European Autoimmunity Standartization Initiative (EASI). Большинство экспертов сходятся во мнении, что определение антинуклеарных антител методом АНФ на клетках Нер-2 с помощью непрямой иммунофлюоресценции является первостепенным в диагностике системной аутоиммунной патологии. Если же для диагностики АНА используется другой лабораторный метод, то диагностические лаборатории должны указывать, каким методом исследуются антинуклеарные антитела. Кроме того, диагностические лаборатории должна указываться специфичность и чувствительность используемого метода выявления антинуклеарных/антиядерных/анти-ЭНА антител по сравнению с АНФ.

Со своей стороны рекомендуем использовать обнаружение антител к ЭНА-скрин (АНА-скрин) в качестве дополнительного метода при сопутствующем выявлении антинуклеарного фактора. Скрининг болезней соединительной ткани  (тест 01.02.15.245) позволяет не пропустить редкие случаи «АНФ-негативной СКВ» и другие заболевания, сопровождающиеся высокорастворимыми антигенами, такими как SSA антиген. Отрицательный результат такого теста позволяет исключить диагноз системного ревматического заболевания с вероятностью 95-98%, что позволяет широко использовать его в целях скрининга и дифференциальной диагностике.

В связи с этим, иммунохимические тесты по выявлению антиядерных (антинуклеарных) антител должны использоваться только совместно с антинуклеарным фактором. При использование иммунохимических методов в качестве единственного метода выявления АНА наблюдается высокая частота ложно-отрицательных результатов обследования (Bossuytetal. Ann Rheum Dis 2008) и ошибочном исключению диагноза аутоиммунного заболевания. В частности методы скринингового определения антинуклеарных антител оказываются бессильны при аутоиммунных заболеваниях печени, ювенильном ревматоидном артрите и ряде других аутоиммунных заболеваний, поскольку не содержат соответствующих антигенов антинуклеарных антител.

Нуклеиновые кислоты (ДНК, РНК) водонерастворимы и отрицательно заряжены, поэтому в состав экстрагируемых ядерных антител не входят. Для их выявления необходимо использовать антинуклеарный фактор и другие подтверждающие тесты (антитела к дсДНК методом ИФА тест 01.02.15.125).

В то же время выявление антител к ЭНА в скрининговом тесте представляет собой отдельный показатель (тест 01.02.15.160), обычно определяемый с помощью метода ИФА. Его использование наряду с определение АНФ позволяет уточнить присутствие в исследуемой сыворотке антител в хорошо растворимым конформационным антигенам, прежде всего SS-A, которые могут утрачиваться в ходе фиксации клеток перевиваемых клеточных линий.

Определение специфичности антинуклеарных антител

Под определением «специфичности антинуклеарных антител» понимают определение аутоантител к конкретным антигенам АНА. Номенклатура конкретных разновидностей АНА зависит как от ядерных мишеней аутоантител, так и методов, с помощью которых они обнаруживаются. Отдельно выделяют АНА реагирующие с нуклеиновыми кислотами, прежде всего ДНК; антитела к водорастворимым антигенам, которые могут быть экстрагированы водно-солевыми растворами, – антитела к экстрагируемому ядерному антигену (ЭНА); антитела к нерастворимым в воде антигенам, а также конформационные антигены, которые разрушаются при препаративном выделении из ядра клетки. Два последних вида аутоантигенов не могут быть получены в очищенном виде, поэтому единственным объективным методом их обнаружения является АНФ с описанием типа свечения ядра клетки. Хотя большинство белков, которые используются в коммерческих наборах для выявления АНА, являются рекобинантными, и уже не экстрагируются из ядер клеток, конкретные разновидности белковых антигенов АНА продолжают называть общим термином «экстрагируемый нуклеарный антиген» (ЭНА) - extractible nuclear antigen (ENA). Иногда исследование специфичностей АНА называют определение антител к ЭНА. Для определения специфичностей антинуклеарных антител в нашей лаборатории мы используем иммуноблот антинуклеарных антител (тест 01.02.15.165)

Уточнение антигеных мишеней АНА зависит от антигенного субстрата, который применяется в иммунологических тестах. Антиген-содержащий субстрат может быть нативным, то есть полученным при минимальной очистке, либо высокоочищенным из ткани с помощью биохимических методов. Кроме того, белки-антигены могут быть получены методами генной инженерии либо синтезированы химически методами пептидного синтеза. Использование того или другого метода очистки или синтеза аутоантигена зависит прежде всего от его биохимической природы и особенностями связывания с ним аутоантител. Рекомбинантные белки и синтетические пептиды более удобны в работе, так как методы их получения легко стандартизируются. Однако чем менее очищен антиген, тем больше он сохраняет свою третичную структуру, таким образом взаимодействие аутоантитела более приближено к условиям взаимодействия «invivo».

Будучи открытыми на стыке клинической иммунологии и молекулярной биологии, аутоантитела против внутриклеточных антигенов способствовали процессу постижения функционирования клеточных структур. Описание антинуклеарных антител активно продолжается в настоящее время одновременно с совершенствованием лабораторных техник и углублением фундаментальных познаний о строении клетки. Большинство видов АНА направлены к сложным комплексам рибонуклеиновых кислот и белков. Изучение антинуклеарных антител зачастую опережало открытие функциональных белков и рибопротеиновых комплексов, что привело к возникновению двойной номенклатуры при описании некоторых видов АНА, включающей как общепринятое название аутоантитела, так и указание конкретного ядерного белка. Обычно тип антинуклеарных антител получал название, в основе которого лежит имя пациента, у которого эта разновидность АНА была впервые обнаружена. В основе более современной номенклатуры лежат клеточные мишени аутоантител, с которыми они взаимодействует.

Таким образом, в основе номенклатура аутоантигенов может строиться на основе следующей информации:

Структура молекулы (двуспиральная ДНК)

Название антигена или мол.масса (snRNP70)

Фамилия больного, у которого были обнаружены (например, Sm - Smith)

Сокращение антигена/заболевания (PM-Scl– полимиозит-склеродермия)

В качестве примера, антитела к антигену Ro/SS-A (Ro по фамилии больного Robair /SS-A - Sjogren’s syndrome A antigen), направлены на белки массой 52 кДа и 60 кДа, связанные с Y1-Y5 РНК в составе сплайсосомы, а антитела к антигену La/SS-B (по больному Lapiere/Sjogren’s syndrome B antigen) направлены на белок, связанный с РНК полимеразой 3. Номенклатура аутоантител, основанная на фамилиях пациентов, постепенно уходит в прошлое, так в современной литературе доминирует название антигенов с указанием молекулярной массы, например, SS-A антиген молекулярной массы 52 и 60 кДа.

Возможна ситуация, при которой указывается конкретная клеточная мишень аутоантител. Так антитела, направленные на ядерный антиген пролиферирующих клеток, получили название по имени белка, с которым они реагируют, - PCNA 1 (proliferating cell nuclear antigen 1). Разновидность АНА может получить название в соответствии с молекулярной массой белка, с которым оно взаимодействует, например аутоантитела анти-р80 направлены на белок массой 80 кДа. Последующие исследования устанавили точную клеточную мишень, как, например, для анти-р80 антител это белок койлин. У больных со склеродермией были обнаружены антитела, направленные на антиген массой 70 кДа, и получившие название Scl-70. Позднее было установлено, что мишенью Scl-70 антител является топоизомераза 1, точнее ее иммунодоминантный эпитоп, получивший название TOPO-1.

Может сложиться ситуация, что в одной сыворотке могут быть одновременно обнаружены антитела разных специфичностей, направленные к нескольким антинуклеарным антигенам. Некоторые антитела часто отмечаются совместно – например антитела к SS-Aи SS-B, либо U1-RNP и Sm антигенам. Эти ассоциации обусловлены тем, что антигены входят в состав одного белкового комплекса, с которым реагируют аутоантитела. Некоторые разновидности АНА могут часто отмечаться совместно за счет того, что они встречаются при одном заболевании или при перекрестных синдромах.

Клиническое значение определения специфичности основных разновидностей антинуклеарных антител приведено в описании соответствующих тестов.

Антитела к двуспиральной (нативной) ДНК

Антитела к двуспиральной ДНК (дсДНК) играют большую роль в диагностике и мониторинге больных с системной красной волчанкой (СКВ), однако их выявление имеет ряд особенностей. Для детекции антител к дсДНК методом иммуноферментного анализа сложно сохранить нативную структуру молекулы.  Так молекула дсДНК несет значительный отрицательный заряд и не может быть непосредственно нанесена на отрицательно заряженный пластик иммуноферментного планшета. Для того, чтобы сорбировать дсДНК на дне лунок  планшета необходимо использовать положительно заряженные вещества-линкеры. Часто использование УФ-облучения планшетов или использование чужеродных белков (например протамина) приводит к деспирализации дсДНК с образованием значительного числа односпиральных молекул или снижению специфичности обследования. В результате большинство твердофазных иммуноферментных систем первого поколения для обнаружения антител к дсДНК оказываются относительно неспецифичными. Практическим ревматологам необходимо знать об этой особенности выявления антител к дсДНК и с осторожностью интерпретировать низкие титры этого показателя. Для выявления антител к дсДНК рекомендуется использовать тест системы второго поколения, обладающие улучшенными клинико-лабораторными параметрами.

Друзья:

VIMANA.su уфология и палеоконтакт
Мини-юбка.ru