Лаборатория диагностики аутоиммунных заболеваний. СПбГМУ им.ак.И.П.Павлова.

 

        
 
 

как нас найти          о лаборатории          направление и прейскурант СПбГМУ          Публикации          Вакансии          Задать вопрос!          полезные ссылки          

  Аутоиммунные заболевания
     Аутоиммунные заболевания, определение
     Аутоиммунные заболевания, эпидемиология
     Аутоантитела при аутоиммунных процессах
     Аутоиммунные заболевания, диагностика
     Клиническая лабораторная эпидемиология
  Системные ревматические заболевания
     Антинуклеарные антитела (АНА)
     Антинуклеарный фактор (АНФ) и тип свечения ядра
     Антинуклеарный фактор на клеточной линии HEp-2 (код 01.02.15.005)
     Антитела к экстрагируемому нуклеарному антигену ENA (код 01.02.15.160)
     Скрининг болезней соединительной ткани (код 01.02.15.245)
     Антитела к двуспиральной дсДНК (дсДНК-NcX), тест второго поколения (тест 01.02.15.124)
     Антитела к нуклеосомам, тест второго поколения (код 01.02.15.425)
     Обследование при СКВ (системной красной волчанке) код 01.02.15.230
     Дифференциальная диагностика СКВ и других ревматических заболеваний (код 01.02.15.430)
     Иммуноблот антинуклеарных антител (код 01.02.15.165)
     Иммуноблот антинуклеарных антител при склеродермии (код 01.02.15.535)
     DAT/Кумбс: скрининг полиспецифических агглютининов (код 01.02.15.890)
     DAT/Кумбс: профиль моноспецифических агглютининов (код 01.02.15.895)
     Холодовые агглютинины (код 01.02.15.900)
     Антитела к дсДНК, подтверждение на Cr.luciliae (код 01.02.15.905)
     Антитела к лимфоцитам, класса IgG (код 01.02.15.925)
  Ревматоидный артрит и артропатии
     Диагностика ревматоидного артрита, критерии
     Диагностика ювенильного артрита
     Диагноз серонегативных артропатий
     АЦЦП анализ: Антитела к циклическому цитруллиновому пептиду, АЦЦП/ССP/ACPA (код 01.02.15.081)
     Антитела к модифицированному цитруллинированному виментину), АМЦВ/ MCV (код 01.02.15.405)
     Ревматоидный фактор (РФ), общее содержание (код 01.02.15.015)
     Антикератиновые антитела, АКА (код 01.02.15.065)
     Ревматоидный фактор класса IgA (код 01.02.15.585)
     Скрининг ревматоидного артрита (код 01.02.15.410)
     Типирование гена HLA B27 (код 01.02.15.307)
     Кристаллы в синовиальной жидкости: диагностика микрокристаллических артопатий (код 01.02.15.385)
  Антифосфолипидный синдром (АФС), патогенез и диагностика
     Критерии диагностики антифосфолипидного синдрома
     Оценке риска тромбоза и акушерской патологии при антифосфолипидном синдроме (АФС)
     Антитела к кардиолипину (АКЛА) классов IgG и IgM (код 01.02.15.145)
     Антитела к бета-2 гликопротеину (код 01.02.15.225)
     Антитела к фосфатидилсерину-протромбину (PS-PT) (код 01.02.15.615)
     Антитела к аннексину V (А5), классов IgG и IgM (код 01.02.15.291)
     Антитела к тромбоцитам класса IgG (код 01.02.15.487)
     Иммуноблот антифосфолипидных антител IgG/IgM (код 01.02.15.875)
  Диагностика васкулитов и поражения почек, Антитела к цитоплазме нейтрофилов
     Классификация первичных васкулитов
     Диагностика васкулитов крупных сосудов
     Диагностика гранулематозных васкулитов
     Диагноз иммунокомплексных васкулитов
     Антинейтрофильные цитоплазматические антитела (АНЦА/ANCA) класса IgG (код 01.02.15.010)
     Антитела к эндотелию на клетках HUVEC (код 01.02.15.395)
     Антитела к протеиназе 3 (ПР-3/PR-3) класса IgG (код 01.02.15.140)
     Антитела к миелопероксидазе (МПО) (код 01.02.15.135)
     Антитела к антигенам антинейтрофильных антител ANCA-панель (код 01.02.15.415)
     Диагностика гранулематозных васкулитов (код 01.02.15.035)
     Антитела к базальной мембране клубочка (код 01.02.15.085)
     Диагностика быстропрогрессирующего гломерулонефрита (код 01.02.15.090)
     Антитела к C1q фактору комплемента (код 01.02.15.365)
     Антитела к рецептору фосфолипазы А2 (PLA2R), диагностика мембранозного гломерулонефрита (код 01.02.15.311)
     Антинейтрофильные антитела (код 01.02.15.680)
     HLA B51 типирование для диагностики болезни Бехчета (код 01.02.15.1185)
  Аутоиммунные заболевания легких и сердца
     Активность АПФ (Ангиотензин-превращающий фермента), диагностика саркоидоза, код 01.02.15.370)
     Неоптерин в сыворотке крови (код 01.02.15.470)
     Антитела к миокарду (код 01.02.15.170)
     Диагностика воспалительных миокардиопатий (код 01.02.15.335)
  Целиакия лабораторная диагностика, анализы у детей и взрослых
     Целиакия (глютеновая энтеропатия), определение и история описания
     Генетика целиакии - типирование HLA-DQ2 и HLA-DQ8 (тест 01.02.15.431) для определения риска целиакии
     Антитела к тканевой трансглютаминазе (ТТГ) класса IgA (TG2) (код 01.02.15.191)
     Антитела к тканевой трансглютаминазе класса IgG (код 01.02.15.186)
     Антитела к глиадину (дезаминированные пептиды глиадина) класса IgG (код 01.02.15.176)
     Морфология и клинические проявлении целиакии
     Распространенность и эпидемиология целиакии
     Антитела и критерии диагностики целиакии
     Антитела к эндомизию IgA (код 01.02.15.195)
     Антитела к дезамидированным пептидам глиадина (ДПГ) класса IgA (код 01.02.15.181)
     Антитела к ретикулину классов IgA и IgG (код 01.02.15.200)
     Скрининг целиакии (код 01.02.15.211)
     Серологическая диагностика (уточнение диагноза) целиакии (код 01.02.15.215)
     Полное обследование при целиакии, развернутая серология (код 01.02.15.221)
     Диагностика целиакия без боли у детей и взрослых
  Пищевая аллергия и непересимость глютена
     Диагностика пищевой аллергии
     Иммуноблот при пищевой аллергии (код 01.02.15.1270 и код 01.02.15.1275)
  Аутоиммунный гастрит и лактазная недостаточность
     Антитела к обкладочным (париетальным) клеткам желудка (код 01.02.15.050)
     Антитела к внутреннему фактору (фактору Кастла) (код 01.02.15.546)
     Диагностика аутоиммунного гастрита и пернициозной анемии (код 01.02.15.610)
     Альфа 1-антитрипсин в стуле, кишечная потеря белка (код 01.02.15.502)
     Ионнный дефицит стула (Остаточная осмолярность, Stool osmotic gap) (код 01.02.15.489)
  Поражения ЖКТ, болезнь Крона, язвенный колит и аутоиммунный панкреатит
     Аутоиммунные заболевания и онкологические заболевания ЖКТ
     Скрытая кровь (гемоглобин) в кале (FOB) в диагностике колоректального рака
     НПВС энтеропатия и фекальные биомаркеры
     Кальпротектин фекальный и другие биомаркеры воспаления при ВЗК
     Кальпротектин фекальный (код 01.02.15.550)
     Гемоглобин в стуле - FOBT (код 01.02.15.720)
     Скрининг заболеваний желудочно-кишечного тракта - FOBT и кальпротектин (код 01.02.15.735)
     Антитела к Saccharomyces cerevisiae (ASCA) и другие антигликановые антитела
     Антинейтрофильные цитоплазматические антитела (АНЦА) при ВЗК
     ASCA анализ: Антитела к сахаромицетам класса IgG (код 01.02.15.250)
     Антитинейтрофильные цитоплазматические антитела (АНЦА) класса IgA (код 01.02.15.460)
     Диагностики болезни Крона и язвенного колита (код 01.02.15.256)
     Антитела к бокаловидным клеткам кишечника (код 01.05.15.486)
     Антитела к экзокринной части поджелудочной железы (код 01.02.15.675)
     Антитела к GP2 антигену классов IgG и IgA (код 01.02.15.631)
     IgG4-ассоциированный аутоиммунный панкреатит
     IgG4-ассоциированные заболевания: панкреатит, сухой синдром, ретроперитонеальный фиброз (болезнь Ормонда), тиреоидит (болезнь Риделя)
     Иммуноглобулин подкласс IgG4, диагностика аутоиммунного панкреатита (код 01.02.15.540)
  Аутоиммунные заболевания печени и генодиагностика
     Генодиагностика заболеваний печени (код 01.02.15.1120)
     Антитела к гладким мышцам (F-актину) (код 01.02.15.040)
     Антитела к микросомам печени почек, LKM-1 (код 01.02.15.055)
     Антитела к митохондриям АМА (М1-М9) (код 01.02.15.045)
     Антитела к асиалогликопротеиновому рецептору (anti-ASGPR) класса IgG (01.02.15.635)
     Скрининг аутоиммунного поражения печени (01.02.15.060)
     Иммуноблот аутоантител при аутоиммунных заболеваниях печени (код 01.02.15.306)
     Развернутая серология аутоиммунных заболеваний печени (код 01.02.15.301)
     Аутоиммунный гепатит
     Диагностика синдрома Жильбера (UTG)
  Аутоиммунные неврологические заболевания
     Олигоклональный иммуноглобулин IgG в ликворе и сыворотке крови (код 01.02.15.155)
     Индекс альбумина в ликворе - Qalb (код 01.02.15.580)
     Антитела к аквапорину 4, диагностика оптиконевромиелита (болезни Девика) (код 01.02.15.576)
     Антитела к NMDA глютаматному рецептору (код 01.02.15.456)
     Антитела к ганглиозидам, иммуноблот (код 01.02.15.620)
     Антитела к ацетилхолиновым рецепторам, АхР, AchR (код 01.02.15.625)
     Антитела к скелетным мышцам (код 01.02.15.115)
     Иммуноблот антител при полимиозите (код 01.02.15.320)
     Антитела к миелину (код 01.02.15.695)
     Антинейрональные антитела, метод нРИФ (код 01.02.15.1085)
     Антитела к нейронам, иммуноблот (код 01.02.15.401)
     Развернутая диагностика митохондриальных заболеваний (MELAS, MERRF, наследственная офтальмоплегия, с-м Кернса-Сейра, нейропатии Лебера и другие состояния). 01.02.15.1300
  Нейрогенетика для диагностики неврологической патологии
     Нейрогенетика и наследственные заболевания
     Экспансионные заболевания в неврологии и экспансии нуклеотидных повторов
     Диагностика болезни Гентингтона (код 01.02.15.750)
     Гентингтоноподобные заболевания 2-го (код 01.02.15.820) и 4-го (код 01.02.15.825) типов
     Дентаторубропаллидолюисова атрофия (ДРПЛА) - (код 01.02.15.830)
     Атаксия Фридрейха (код 01.02.15.755)
     Синдром Мартина-Белла (код 01.02.15.880)
     Синдром тремора-атаксии (код 01.02.15.880)
     Миотоническая дистрофия 1 типа (01.02.15.745)
     Миотоническая дистрофия 2 типа (код 01.02.15.740)
     Окулофарингеальная миодистрофия (код 01.02.05.255)
     Спинальная мышечная атрофия, ассоциированная с геном SMN1 (код 01.02.15.860)
     Болезнь Кеннеди (код 01.02.05.250)
     Наследственный боковой амиотрофический склероз, экспансия в гене C9orf72 (код 01.02.15.860)
     Генодиагностика болезни Шарко-Мари-Тута 1А и наследственной нейропатии с параличами от сдавления (ген PMP22)(код 01.02.15.765)
     Аутосомно-доминантные спиноцеребеллярные атаксии
     Первичная дистония 1 типа (код 01.02.15.855)
     Генетические аспекты задержки развития и нарушения интеллектуальных функций (коды 01.02.05.300; 01.02.05.330; 01.02.05.295;01.02.15.880; 01.02.05.290)
     Выявление субтеломерных делеций и анеуплоидий (код 01.02.05.330)
     Моногенные причины отставания развития (код 01.02.15.880 и 01.02.05.290)
     Диагностика основных микродупликационных и микроделеционных синдромов (код теста 01.02.05.300)
     Генетика тромбофилии: выявление полиморфизмов генов F2, F5, F7, F13, FGB, ITGA2, ITGB3, PAI-1 (код 01.02.05.270)
     Исследование гена SOD1 при боковом амиотрофическом склерозе (01.02.15.1145)
     Генодиагностика спастической параплегии (болезнь Штрюмпеля) (SPG4). 01.02.05.305
     Генодиагностика наследственных форм болезни Паркинсона (включает копийность PARK1 (SNCA; alpha-synuclein), PARK2 (Parkin), PARK5 (UCHL1), PARK6 (PINK1), PARK7 (DJ1), PARK8 (Dardarin) и ATP13A2, точечные мутации SNCA A30P, LRRK2 G2019S). 01.02.15.1015
     Генодиагностика болезни Фабри (GLA). 01.02.15.1150
     Синдром тремора/атаксии (01.02.15.880)
     Комплексная генодиагностика гентингтоноподобных заболеваний (код 01.02.15.835).
     Комплексная генодиагностика мозжечковых атаксий (СЦА 1,2,3,6,7; болезнь Фридрейха). Код 01.02.15.815
     Комплексная диагностика редких форм спиноцеребеллярных атаксий (СЦА 8,10,12,17, 36) . Код 01.02.15.1195
  Аутоиммунные эндокринопатии
     Стимулирующие антитела к рецептору ТТГ (тиреотропного гормона) (код 01.02.15.270)
     Антитела к антигенам островковых клеток (GAD/IA2) (код 01.02.15.571)
     Антитела к островковым клеткам (ICA) (код 01.02.15.265)
     Антитела к инсулину, эндогенному (код 01.02.15.556)
     Антитела к глютаматдекарбоксилазе (GAD) (код 01.02.15.561)
     Антитела к тирозин-фосфатазе (IA-2) (код 01.02.15.566)
     Антитела к стероидпродуцирующим клеткам надпочечника (код 01.02.15.120)
     Антитела к стероид-продуцирующим клеткам яичка (код 01.02.15.446)
  Аутоиммунные заболевания и биопсия кожи
     Антитела к десмосомам (код 01.02.15.100)
     Антитела к базальной мембране кожи (код 01.02.15.105)
     Диагностика буллезных дерматозов (код 01.02.15.110)
     Антитела к десмоглеину-1 (код 01.02.15.590)
     Антитела к десмоглеину 3 (код 01.02.15.595)
     Антитела к белку ВР 180 (код 01.02.15.600)
     Антитела к белку ВР230 (код 01.02.15.605)
  Парапротеинемии и иммунофиксация
     Парапротеин, его свойства
     Миелома и другие парапротеинемии
     Скрининг парапротеинов (М-градиента) в сыворотке крови, иммунофиксации с поливалентной сывороткой (код 01.02.15.421)
     Иммунофиксация парапротеина (M-градиента) сыворотки крови с панелью антисывороток (IgG/A/M/E/D/k/l) (код 01.02.15.655)
     Свободные легкие цепи иммуноглобулинов при парапротеинемиях
     Диагностика амилоидоза: аспираты подкожного жира и мониторинг амилоидоза
     Протеинурия и белок Бенс-Джонса в моче с помощью иммунофикации (код 01.02.15.640)
     Диагностика синдрома гипервязкости крови (код 01.02.15.870)
  Биомаркеры аутоиммунных заболеваний
     Иммунные комплексы IgG, связывающие C1q
     Общая гемолитическая способность сыворотки (CH-50) (код 01.02.15.700)
     Выявление иммунокомплексной патологии (С1q-ИК и СН-50) (код 01.02.15.730)
     Ингибитор С1 эстеразы (С1INH) (код 01.02.15.705)
     Определение неоптерина в сыворотке крови (тест 01.02.15.470)
  Диагностика нарушений обмена
     Комплекс электрофореза липидов с типированием дислипидемий
     Комплекс электрофореза липидных фракций с типированием гиперлипидемий по классификации ВОЗ (ЛПВП, ЛОНП, ЛПНП, Lp(a), хиломикроны)
     Электрофорез основных липидных фракций с расчетом содержания триглицеридов (код 01.02.15.1155)
     Электрофорез основных липидных фракций с расчетом содержания холестерина (код 01.02.15.1160)
     Генодиагностика семейной гиперхолестеринемии (ген LDLR)
     Мутации в гене PCSK9, характерные для редкой формы наследственной гиперхолестеринемии
     Выявление мутаций в гене APOB100, характерных для наследственной гиперхолестеринемии
     Комплексная диагностика семейной гиперхолестеринемии (АРОВ100, LDLR, PCSK9)
     Типирование аллелей е2, е3, е4 гена АРОЕ
  Диагностика анемий
     Диагностика аутоиммунной гемолитической анемии
     Осмотическая стойкость эритроцитов для диагностики неиммунных гемолитических анемий (код 01.02.15.930)
     Электрофорез гемоглобина для диагностики гемоглобинопатий
     Коэффициент рецептора трансферрина/ферритин (код 01.02.15.945)
  Лабораторная диагностика мочекаменной болезни (МКБ)
     Исследование рН мочи в ранней утренней и дневной моче (код 01.02.15.1105)
     Кальций-креатининовый индекс разовой мочи (код 01.02.15.1100)
     Исследование литогенных субстанций суточной мочи (код 01.02.15.1090)
  Онкогенетика: выявление онкогенов в материале опухолей
     Онкоген BRAF (колоректальный рак, рак легкого, меланома, рак щитовидной железы)
     Онкоген NRAS (колоректальный рак, рак щитовидной железы, меланома)
     Онкоген KRAS (колоректальный рак, рак легкого, рак щитовидной железы)
     Онкоген HRAS (рак щитовидной железы)
     Онкоген EGFR (рак легкого)
     Онкоген ALK (рак легкого)
     Онкоген ROS1 (рак легкого)
     Мутации онкогена BRCA (рак молочной железы)
     Экспрессия онкогена HER2 (рак молочно железы)
     Мутации гена c-KIT (меланома)
     Микросателлитная нестабильность (MSI) (01.02.05.245)
     Определение мутаций гена PDGFRa
     Определение экспрессии PDL1.
     Выявление мутаций в цитологическом и гистологическом материале при образованиях щитовидной железы (мутации в генах BRAF, TERT, KRAS, NRAS, HRAS, RET/PTC, PAX8/PPRGy) (01.02.15.1210)
     Выявление мутаций в цитологическом или гистологическом материале образований легкого (мутации в генах EGFR, KRAS, BRAF, HER2) ( 01.02.15.1205)
     Исследование мутаций в ткани при колоректальном раке (MSI, мутации в генах KRAS, NRAS, BRAF) (01.02.15.1230)
  Диагностика рака предстательной железы (экспрессия PCA3 гена и TMPRSS2-ERG)


для медицинских работников:
подписаться на рассылку

зарегистрируйте свою электронную почту на сайте и получайте дополнительные информационные материалы по аутоиммунной диагностике


Вход на сайт
Логин:
Пароль:

зарегистрироваться вспомнить пароль


где сдать анализ крови на тест анализы спб СПб инвитро Петербург Питер на целиакию аутоиммунные заболевания аутоантитела онкогенетика онкогены онкоген аутоиммунная диагностика Лапин autoimmun антиядерные лабораторная антинуклеарный фактор антинуклеарные антитела HEp-2 тип волчанка свечения амилоидоз склеродермия иммуноблот ревматоидный цитруллиновый расшифровка экстрагируемые скрининг заболевания смешанное системная СКВ артрит дсДНК CCP ССР АЦЦП саркоидоз антинейтрофильные криоглобулины гранулематозные АНФ АНЦА ANCA ENA иммунофиксация васкулиты Крона целиакия аутоиммунный печени язвенный колит глиадину трансглутаминазе стероидпродуцируюшим Вегенера яичника эндокринопатии пузырные пузырчатка пемфигоид рассеянный склероз миастения миелина белок олигоклональный изоэлектрофокусирования IgG IgA IgM легкие цепи полиневрит ганглиозидам полимиозит парапротеин миелома неоптерин островковые GAD антимитохондриальные гладкие скелетные мышцы ASCA колит антигену фосфолипидный синдром кардиолипину фосфолипидам гликопротеину нуклеосомам SSA SSB RNP Sm CENT Scl Jo-1 АМА антикератиновые антиперинуклеарный MCV LKM-1 рецептору иммунофлюоресценция ИФА иммунологическая лаборатория университет санкт-петербург павлова Чардж-Стросса полиангиит микрокристаллические первичный билиарный цирроз трансглутаминаза трансглютаминаза критерии ревматоидного артрита 2010 года СПб Питер Петербург нейрогенетика BRCA NRAS KRAS BRAF HER2 MSI PCA3 тест мутации

Что ищут на нашем сайте:

фактор касла, СРБ, sp100, аутовоспалительные заболевания, AT к стероидпродуцирующим клеткам н, Анализ АНФ, антитела к стероидпродуцирующим, Васкулит, Антинуклеарные антитела, Антитела к тканевой трансглутамин, иммуноблот на антиядерные антител, вирусный гепатит С, Иммунолог, Миеллпероксидаза, М2 3Е АМА М2, группа крови, SS A 52 60 ANA Screen антитела IgG, синдром перек, метод Вестергрена, концентрация инфликсимаба, иммунология.

Системные ревматические заболевания
Антинуклеарный фактор (АНФ) и тип свечения ядра

Определение антинуклеарного фактора (АНФ) на НЕр-2 клетках (тест 01.02.15.005)  представляет собой основной метод выявления антинуклеарных антител (АНА), позволяющий обнаружить большинство их разновидностей, включая аутоантитела к нуклеиновым кислотам (двуспиральной ДНК, односпиральной ДНК, РНК), конформационным и нерастворимым антигенам. Результатом определения АНФ является выявление факта присутствия аутоантител в диагностическом титре, конечный титр разведения сыворотки, отражающий аффинность и концентрацию аутоантител, а также тип свечения ядра клетки. Характеристики конкретной методики зависят, прежде всего, от выбора субстрата, который может быть представлен криосрезами (крысиных печени или почки) или культивируемыми пролиферирующими клеточными линиями (Hep2, Kb, HeLa), а также от метода фиксации ткани, который может влиять на сохранность ряда ядерных антигенов АНА.Исторически использовался ряд клеточных и тканевых субстратов для выявления АНФ, но в настоящее время, повсеместно используется клеточная линия эпителиоидных клеток аденокарциномы гортани человека HEp2

История разработки тестов для выявления антинуклеарных антител

В начале ХХ века в ряде исследований были впервые выявлены «гиалиновые тельца» в цитоплазме лейкоцитов. В 1948 году Hargraves, Richmond, Morton разработали метод, позволивший обнаружить и описать LE-клетки, представляющие собой лейкоциты, содержащие фагоцитированные ядра разрушенных лейкоцитов,путем длительной инкубации лейковзвеси больных системной красной волчанкой invitro. Два года спустя, в 1951, группа ученых Lee, Michael и Vural обнаружили сывороточный фактор, стимулирующий фагоцитоз ядер лимфоцитов лейкоцитами периферической крови. В 1957 году для выявления антинуклеарного фактора на криосрезах печени человека Holoborow, Weir и Johnson использовали метод непрямой иммунофлюоресценции, разработанный Coons в 1950 году. Позже, в 1958 году Jones обнаружил в крови больных синдромом Шегрена фактор, способный преципитировать экстракты ядер клеток, что послужило толчком для описания большинства разновидностей антинуклеарных антител. Проводился и дальнейший поиск оптимального субстрата для выявления антинуклеарных антител. Так, в 1961 году, Beck использовал ткани лабораторных животных. В 1982 году E. Tan впервые провел исследование антинуклеарного фактора на перевиваемой клеточной линии человека HEp-2, и впоследствии данный метод стал «золотым стандартом» выявления антинуклеарных антител.

Метод непрямой иммунофлюоресценции на перевиваемой клеточной линии Нер2

Данный метод выявления АНФ был разработан Таном (Tan, 1982), применившим в качестве субстрата человеческую перевиваемую эпителиоидную клеточную линию HEp-2 (ATCC ref.no. CCL-23). Эта клеточная линия, полученная из аденокарциномы гортани человека, представляет собой крупные полиплоидные неороговевающие плоские эпителиоциты, образующие монослой на пластике и стекле.

     клеточная линия Нер2     

Рисунок 1. Клетки клеточной линии НЕр-2, окрашенные гематологическим красителем.

Сравнительная неприхотливость этой линии, крупные ядра и присутствие всех человеческих антигенов сделало метод непрямой иммунофлюоресценции с использованием перевиваемой клеточной линии НЕр-2 основным методом обнаружения АНФ. В англоязычной литературе отсутствует единое название для этого метода, иногда этот метод для краткости обозначают как FANA (Fluorescent AntiNuclear Antibody detection). Отсутствие единства номенклатуры породило путаницу в названии лабораторных тестов. Иногда под термином «антинуклеарные антитела» иммунологические лаборатории понимают как тесты, основанные на методах иммуноферментного и иммунохимического анализа, так и те, в основе которых лежит метод иммунофлюоресценции. В русскоязычной литературе считается необходимым сохранить отечественное название этого показателя - «антинуклеарный фактор» (АНФ) - для проведения различия между иммунофлюоресцентным методом и другими тестами для обнаружения АНА.

Необходимо выявлять АНФ класса IgG, так как выявление АНФ, представленного другими классами иммуноглобулинов, не имеет самостоятельного диагностического значения. В процессе проведения анализа стандартные разведения сыворотки больного инкубируются с тканевым субстратом, что позволяет антинуклеарным антителам из сыворотки связаться с соответствующими ядерным мишенями. В дальнейшем, места связывания аутоантител детектируются с помощью античеловеческой сыворотки, меченой флюоресцеином.

      Непрямая / прямая иммунофлюресценсия (нРИФ)      

Рисунок 2. Схема метода непрямой иммунофлюоресценции для выявления антинуклеарного фактора.

Хотя в качестве субстрата могут применяться и другие человеческие клеточные линии, благодаря хорошей морфологии и удобству культивирования именно линия Нер-2 стала общепризнанным оптимальным субстратом для реакции непрямой иммунофлюоресценции. Ее применение улучшает чувствительность теста за счет яркой флюоресценции даже при значительных разведениях сыворотки больного, а большое, богатое эухроматином ядро позволяет точно описать тип свечения. Кроме того, применение клеточной линии Hep-2 способствует обнаружению антител Ro/SS-A, а также антител к антигенам ядрышка, которые плохо видны при использовании криосрезов ткани лабораторных животных. Среди других преимуществ HEp-2 следует отметить высокую частоту деления клеток, позволяющую выявлять антитела к антигенам, которые экспрессируются только при делении клетки, и отсутствие клеточного матрикса ткани, затрудняющего визуализацию специфического свечения при сравнении с гистологическими срезами. На отечественном рынке реактивы для определения АНФ представлены рядом производителей, например Euroimmun AG (Германия), Immco (США), BioSystems, (Испания), Medipan AG (Германия). Субстраты несколко варьирую по числу клеточных делений, а также возможность совместного иммунофлюоресцентного исследования в одном реакционном поле других субстратов.

Титры антинуклеарного фактора

Титр АНФ определяется как последнее разведение сыворотки больного, при котором отмечается четкая флюоресценция ядер клеток. На основании титрования может быть определен уровень антител, и эта информация ассоциирована с  клинической значимостью результата теста. Высокие уровни антител в большей степени ассоциированы с системными аутоиммунными заболеваниями, а также антигенная специфичность АНА в высоких титрах чаще подтверждается при дальнейшем тестировании.

При использовании тканей лабораторных животных диагностический титр АНФ составляет 1:8-1:10, в то время как при использовании клеточной линии НЕр-2 рекомендуется использовать исходный титр 1:80. В этом случае в норме титры АНФ составляют менее 1:160.При использовании титров менее 1:160 частота слабоположительных результатов у клинически здоровых лиц составляет не более 5% и, в то же время, не пропускаются значимые титры АНА у больных диффузными болезнями соединительной ткани.

Для определения конечного титра обычно используется титрование шагом x2 (1:160-1:320 - 1:640 - 1:1280 – 1:2560 – 1:5120 и т.д.). Может использоваться и более грубое титрование, например 1:10-1:100-1:1000-:1:10000. На фоне обострения ревматических заболевания обычно отмечаются титры АНФ более 1:640, а при ремиссии титры снижаются до 1:160-1:320. Принята также запись титра через "/", например 1/320 или 1/1280... Все чаще титры записывают величиной обратной разведению сыворотки, в таком случае форма записи титра антинуклеарного фактора принимаает вид <160 - 160 - 320 - 640 - 1280 - 2560 - 5120 - 10240 - и т.д.

Существуют рекомендации по бальной оценке результатов выявления АНФ, указывающей содержание «в крестах». Это позволяет лабораториям экономить реактивы и уменьшить трудозатраты на выполнение исследований. В этом случае определение конечного титра не представляется возможным. Необходимо учитывать, что конечный титр имеет более важное значение по сравнению с количеством связавшихся с субстратом аутоантител, так как непосредственно связан с аффинностью их взаимодействия с антигеном. Желательно определять конечный титр у всех положительных больных, что позволяет уточнить присутствие в сыворотке высокоаффинных аутоантител, которые более тесно связаны с активностью процесса.

Тип свечения ядра антинуклеарного фактора

Уже в первом опыте клинического применения непрямой иммунофлюоресценции для выявления АНФ с использованием криосрезов тканей лабораторных животных было отмечено, что сыворотка больных аутоиммунными заболеваниями по-разному «окрашивала» ядра клеток, что приводило к селективному свечению некоторых структур ядра. Уточнение этого феномена привел к описанию так называемых «типов свечения» ядра в иммунофлюоресцентном тесте. Это связано с тем, что каждая разновидность АНА имеет конкретные клеточные мишени, вследствие чего тип свечения ядра, ядрышка и цитоплазмы клетки отражает взаимодействие АНА сыворотки больного с антиген-содержащими структурами внутри клетки. Тип свечения зависит от присутствия конкретных аутоантител в сыворотке крови больного, на основе чего можно сделать предварительное заключение относительно тех разновидностей АНА, которые имеются в данной сыворотке. Распределение антигенов внутри клетки определяет тип свечения ядра, который позволяет судить о спектре АНА, присутствующих в данной сыворотке. Не всегда при наличии даже высоких тиров АНФ можно установить антигенную специфичность АНА, поскольку многие антигены, выявляющиеся с помощью АНФ, относят к конформационным (т. е. нестойким) и до сих пор плохо охарактеризованы.Применение гистологических срезов тканей лабораторных животных не позволяет достоверно установить тип свечения. В то же время, использование перевиваемых клеточных линий, таких как Нер-2, позволяет описать значительное количество вариантов окрашивания ядра и цитоплазмы. Существует три основные группы антигенов, присутствие антител к которым определяет различные типы свечения:

 

           Основные антигены антинуклеарных тел           

Рисунок 3. Основные антигены антинуклеарных антител.

Тип свечения ядра клетки значительно увеличивает информативность выявления АНФ, в связи с чем должен рутинно определяться при определении этого показателя. Использование клеток линии НЕр-2 позволяет охарактеризовать более 20 различных вариантов окрашивания ядра, которые зависят от спектра АНА, присутствующих в исследуемой сыворотке. Однако для практической лаборатории достаточно различать 6 основных вариантов связывания аутоантител с антиген-содержащими структурами клетки.

 

            Типы свечения ядра клетки            

Рисунок 4. Основные клинически значимые типы свечения антинуклеарного фактора.

Выделяют гомогенный, периферический, гранулярный (мелко-/крупно-), ядрышковый, центромерный и цитоплазматический типы свечения ядра. Каждому типу свечения присущи очень характерные признаки, которые позволяют отличить один вариант от другого, а также определить набор антигенов, с которыми реагируют аутоантитела в сыворотках больных. Описание типов свечения представляет ценную клиническую информацию, кроме того, тип свечения может указывать на необходимость проведения определенных лабораторных тестов в дальнейшем с целью уточнения антигенной специфичности выявленных АНА. Однако некоторые типы свечения сами по себе несут необходимую клиническую информацию для постановки диагноза, как, например, центромерный тип свечения включен в классификационные критерии ССД, в то время как ядерный  плотный мелкогранулярный тип свечения, ассоциированный с DFS-70 антигеном, чаще выявляется у здоровых людей и свидетельствует об отсутствии системного аутоиммунного заболевания.

 

             Типы свечения и диагностическое значение

             

Рисунок 5. Основные клинически значимые типы свечения антинуклеарного фактора.

При гомогенном типе свечения аутоантитела реагируют с антигенами, распределенными в ядре диффузно, то есть входящими в состав хроматина. При гомогенном типе свечения в делящихся клетках характерно ярко окрашиваются конденсированные хромосомы. Основными структурными единицами хроматина являются нуклеосомы - комплексы ДНК и гистонов. Таким образом, гомогенный тип свечения предполагает наличие антител против нуклеосом, двуспиральной ДНК и гистонов. Он встречается у больных с системной красной волчанкой и лекарственной волчанкой, а также у больных со склеродермией. Обычно обнаружение высокого титра АНФ с гомогенным типом свечения указывает на диагноз «системная красная волчанка».

Периферический тип свечения часто выделяют отдельно, хотя он является разновидностью гомогенного типа свечения. Его выявление является артефактом фиксации клеток, что приводит к перераспределению хроматина в ядре на периферию. Важно отличать периферический тип свечения от окрашивания ядерной мембраны, которое отмечается при аутоиммунных заболеваниях печени. Периферический тип свечения обнаруживается у больных с антителами к двуспиральной ДНК и выявляется преимущественно у пациентов с системной красной волчанкой.

Гранулярный тип является наиболее часто встречающимся и, одновременно, наиболее неспецифическим. Иногда этот тип свечения в отечественной литературе называют «крапчатым» или «сетчатым». Название «гранулярный» более точно отражает этот феномен, так как в этом случае аутоантитела реагируют с гранулами в ядре, представляющими надмолекулярные нуклеопротеиновые комплексы. Такие комплексы белков и нуклеиновых кислот осуществляют в ядре ряд функций, необходимых для нормального функционирования клетки. К таким комплексам, в частности, относятся сплайсосомы, которые осуществляют посттранскрипционную перестройку мРНК, необходимую для синтеза белка на рибосомах. В составе присутствует множество различных нуклеопротеинов, что обуславливает многообразие антигенных мишеней при обнаружении гранулярного типа свечения. К основным аутоантигенам, антитела к которым приводят к визуализации гранулярного типа свечения, относят Sm, U1-RNP, SS-A, SS-B антигены и PCNA. Клетки в процессе деления утрачивают большинство сформированных нуклеопротеиновых комплексов, поэтому митотические фигуры в клеточной линии при гранулярном типе свечения не окрашиваются. Гранулярный тип свечения ядра отмечается у больных при системной красной волчанке, синдроме Шегрена, системной склеродермии, дерматомиозите, полимиозите, ревматоидном артрите и ряде других аутоиммунных заболеваний. Низкие титры АНФ с гранулярным типом свечения преобладают в сыворотке крови у клинически здоровых лиц с АНФ без признаков системного заболевания.

Выявления очень высоких титров АНФ (1:2560-1:10000) с крупногранулярным типом свечения ядра обычно указывает на диагноз смешанного заболевания соединительной ткани и требует дообследования для выявления RNP-антигена, который является основным серологическим маркером этого заболевания.

Антигены ядрышка могут выступать в качестве мишеней АНА, что приводит к обнаружению ядрышкового типа флюоресценции. Выявление ядрышкового типа свечения характерно для склеродермии и ее разновидностей. Ядрышковый тип флюоресценции определяется у больных при наличии антител к компонентам ядрышка, таким как PHК-полимераза 1, NOR, U3RNP, PM/Scl.

Центромерный тип флюоресценции отмечается при появлении антител к центромерам хромосом, и обнаруживается только в делящихся клетках. Его присутствие характерно при CREST-варианте склеродермии.

Цитоплазматический тип свечения указывает на наличие антител к тРНК–синтетазам, в частности, к Jo-1, которые отмечаются при полимиозите. Кроме того, он выявляется у больных с АНА, направленными против других компонентов цитоплазмы клетки: антитела к актину при аутоиммунном гепатите, антитела к митохондриям при первичном билиарном циррозе.

Можно охарактеризовать ряд других разновидностей свечения, причем эти типы окрашивания ядра клеток могут быть характерны для конкретной разновидности АНА. Так, антитела к Scl-70 в иммунофлюоресцентном тесте на HEp-20 клетках дают мелкогранулярное окрашивание ядра и ядрышек, анти-р80 - светящиеся точки в ядре, которые отсутствуют в митотических клетках. Однако необходимо отметить редкость и разнообразие таких феноменов, что делает излишним их выявление при рутинных исследованиях.

Нередко может встречаться сочетание нескольких типов свечения, например, мелкогранулярного и ядрышкового, что характерно для антител к Scl-70. Более того, часто в низких разведениях преобладает один тип свечения, например, гранулярный, а при дальнейших разведениях выявляется гомогенный или центромерный типы флюоресценции, что свидетельствует о наличии в сыворотке больного различных видов АНА. Хотя тип свечения дает врачу определенные данные в пользу того или иного диагноза, необходимо принимать во внимание сравнительно низкую его специфичность и разнообразие встречающихся феноменов, что требует дальнейшего лабораторного обследования.

Обнаружение АНФ является основой для использования других лабораторных тестов, уточняющих спектр АНА в крови больных. Учитывая крайнюю информативность этого теста, дальнейшее тестирование и анализ результатов последующего обследования должен интерпретироваться в зависимости от результатов оценки типа свечения и титра АНФ.

Хотя отсутствие значимых титров АНФ практически всегда исключает диагноз активного системного ревматического заболевания, при использовании клеточной линии НЕр-2 у 2-4% больных, удовлетворяющих критериям для диагноза системной красной волчанки, АНА не определяются или титры низки. Этих больных иногда относят к группе «АНФ-негативной системной красной волчанки». Для уточнения диагноза у таких больных требуется дальнейшее обследование, прежде всего, выявление антител к SS-Антигенам. Эти антигены обладают хорошей растворимостью и могут утрачиваться из ядер клеток. Для сокращения этой категории пациентов используется комплексное тестирование, включающее определение антител к экстрагируемым ядерным антигенам, так называемый «скрининг заболеваний соединительной ткани», тест 01.02.15.245. Отрицательный результат такого обследования позволяет с очень высокой вероятностью позволяет исключить диагноз системной красной волчанки и других системных ревматических заболевании.

Современная номенклатура ICAP 2014 типов свечения антинуклеарного фактора.

Международная согласительная группа по типам свечения была основана на секции в рамках Международного семинара по Аутоиммунитету и аутоантителам (IWAA) в Сан-Паоло, Бразилии, в 2014 году. Результатом этой работы стало формирование обобщенной номенклатуры и описания типов свечения АНФ, базы микрофотографий, а также классификации с делением на уровни компетентности при оценке типов свечения. Для популяризации результатов работы Согласительной группы ICAP был создан сайт в интернете https://www.anapatterns.org, на котором была представлена номенклатура с подробным описанием типов свечения, которая на сегодняшний день насчитывает 30 типов свечения, включая отрицательный (#AC-0).

 

Рисунок 6. Номенклатура и схема классификации для нуклеарных, цитоплазматических и митотических типов свечения НРИФ  на субстратах клеток HEp-2

 

 

Ядерные типы свечения определяются как любое окрашивание интерфазных ядер HEp-2, независимо от окрашивания митотических клеток (Рисунок 7). В общей сложности 6 основных групп и 11 подгрупп могут быть выделены на основе окрашивания отдельных ядерных компонентов в интерфазных клетках (табл.1). Соответствующая номенклатура в основном основана на особенностях флюоресценции, наблюдаемой в нуклеоплазме и ядерных структурах (см. центромеры или ядрышки).

 

 

Таблица 2. Ядерные типы свечения и их ассоциации с аутоантигенами и заболеваниями

 

Тип свечения

Ассоциация с антигеном

Ассоциации с заболеванием

Гомогенный АС-1

дсДНК, нуклеосомы, гистоны

СКВ, лекарственная волчанка, ювенильный идиопатический артрит

Гранулярные ядерные типы (АС-2,3,4,5 ) включают:

Плотный мелкогранулярный АС-2

DFS70/LEDGF

редко при синдроме Шегрена, ССД и СКВ

Центромерный АС-3                                                 

CENP-A/B (C)

Лимитированная кожная форма ССД, ПБЦ

Мелкоганулярный АС-4 

SS-A/Ro, SS-B/La, Mi-2, TIF1γ, TIF1β, Ku

Синдром Шегрена, СКВ, дерматомиозит

Крупногранулярный АС-5 

hnRNP, U1RNP, Sm, РНК полимераза III

СЗСТ, СКВ, ССД

ДНК-топоизомераза I (topo I) АС-29

ДНК топоизомераза I

Системная склеродермия

Типы свечения точки в ядре (АС-6,7) включают:

Множественные АС-6

Sp-100, белки PML , MJ/NXP-2

ПБЦ, ДБСТ, дерматомиозит

Единичные АС-7

p80-coilin, SMN

Синдром Шегрена, СКВ, ССД, ПМ, лица без симптомов

Ядрышковые типы свечения (АС-8,9,10) включают:

Гомогенный АС-8

PM/Scl-75, PM/Scl-100, Th/To, B23/нуклеофосмин, нуклеолин, No55/SC65

ССД, перекрестный синдром ССД/ПМ

Глыбчатый АС-9

U3-snoRNP/фибрилларин

ССД

Точечный АС-10

РНК полимераза I, hUBF/NOR-90

ССД, синдром Шегрена

Свечение ядерной мембраны (АС-11,12) включают:

Гладкий мембранный АС-11

ламины A,B,C, или  ламин-ассоциированные белки

СКВ, СШ, серонегативный артрит

Точечный мембранный АС-12

Протеиновый комплекс ядерных пор  (i.e. gp210)

ПБЦ

Плеоморфные ядерные типы (АС-13,14) включют:

PCNA  АС-13

PCNA

СКВ, другие состояния

CENP-F  АС-14 

CENP-F

Онкологические заболевания, другие состояния

 

 

 

Рисунок 7. Ядерный типы свечения антинуклеарного фактора

 

Цитоплазматические типы свечения определяются как любое окрашивание цитоплазмы HEp-2, независимо от окрашивания ядер или митотических клеток. Общая схема классификации для цитоплазматических типов свечения представлена на рисунке 6, и изображения показаны на рисунке 8.  Пять основных типов свечения – это фибриллярный, гранулярный, митохондриальный, Гольджи, палочки и кольца (ПК) – рекомендуется выявлять в клинических лабораториях компетентного уровня. Номенклатура основана главным образом на наблюдаемом характерном окрашивании цитоплазмы (см. фибриллярный или гранулярный типы) или цитоплазматической структуры (см. палочки и кольца). Ассоциации с аутоантигенами и болезни приведены в таблице 3.

 

Таблица 3. Цитоплазматические типы свечения и их  ассоциации с аутоантигенами и заболеваниями

Тип свечения

Ассоциация с антигеном

Ассоциации с заболеванием

Фибриллярные цитоплазматические типы (АС-15,16,17) включают:

Линейные волокна в цитоплазме

АС-15

Актин, немышечный миозин

СЗСТ, хронический активный гепатит, цирроз печени, миастения гравис, болезнь Крона, ПБЦ, продолжительный гемодиализ, редко при ДБСТ

Фибриллярные нити в  цитоплазме АС-16

Виментин, цитокератин, тропомиозин

Инфекции или воспалительные процессы, продолжительный гемодиализ, алкогольная болезнь печени ,ДБСТ, псориаз, здоровые доноры

Фибриллярные сегменты в цитоплазме АС-17

Альфа-актинин, винкулин

Миастения Гравис, болезнь Крона, язвенный колит

Гранулярные цитоплазматические типы (АС-18,19,20) включают

Отдельные точки в цитоплазме/GW-подобные тельца в цитоплазме АС-18

GW182, Su/Ago2, * нет молекулярно-биологических данных в поддержку связи данного паттерна с лизосомальными антигенами

ПБЦ, ДБСТ, неврологические и аутоиммунные состояния

Цитоплазматический плотный мелкогранулярный АС-19

PL-7, PL-12, рибосомальный белок P

"антисинтетазный синдром", ПМ/ДМ, СКВ, ювенильная СКВ, нейропсихиатрическая СКВ

Цитоплазматический мелкогранулярный АС-20

Jo-1/гистидил-тРНК-синтаза

«антисинтетазный синдром», ПМ/ДМ, локальная ССД, идиопатический плевральный выпот

Митохондриальный/ретикулярный АС-21

PDC-E2/M2, BCOADC-E2, OGDC-E2, E1α субъединица PDC, E3BP/белок X

Чаще при ПБЦ, ССД, редко при ДБСТ

Полярное свечение/ комплекс Гольджи в цитоплазме АС-22

гиантин/макрогольджин, гольджин-95/GM130, гольджин-160, гольджин-97, гольджин-245

Редко при СШ, СКВ, РА, ДБСТ, гранулематозе Вегенера, идиопатической мозжечковой атаксии, паранеопластической мозжечковой дегенерации, вирусных инфекциях

Палочки и кольца АС-23

IMPDH2

Пациенты с ХГС после ИФН/рибавирин терапии, редко СКВ, тиреоидит Хашимото и здоровые доноры