Диагностика васкулитов и поражения почек, Антитела к цитоплазме нейтрофилов
Антинейтрофильные цитоплазматические антитела (АНЦА/ANCA) класса IgG (код 01.02.15.010)
Диагностика системных васкулитов и воспалительных заболеваний кишечника.
Описание теста:
Антинейтрофильные цитоплазматические антитела (АНЦА) были впервые описаны при гранулематозных васкулитах с поражением почек (Davies, 1982).При системных васкулитах в качестве основных антигенов антинейтрофильных антител выступает ряд ферментов содержащихся в азурофильных гранулах нейтрофилов. К известным антигенным мишеням АНЦА относятся протеиназа-3, миелопероксидаза, лактоферрин, эластаза, белок BPI и катепсин G. Антинейтрофильные антитела также используются в качестве диагностических маркеров при воспалительных заболеваниях кишечника и нейтропениях, однако при этих заболеваниях антигены аутоантител неизвестны. Метод непрямой иммунофлюоресценции остается «золотым стандартом» выявления антинейтрофильных антител, поскольку позволяет определить как частые антигены (такие как протеиназа 3 или миелопероксидаза), так и редкие мишени аутоантител, которые охарактеризованы недостаточно хорошо.
Высокая встречаемость АНЦА при гранулематозных васкулитах ставит вопрос об их роли патогенезе васкулитов. Появление антител к антигенам нейтрофилов связывают с бактериями, колонизирующими носоглотку (стафилококки), которые производят суперантигены. Кроме того, воспаление приводит к экспрессии антигенов антинейтрофильных антител на поверхности лейкоцитов и эндотелия. Хотя точный механизм индукции АНЦА остается неизвестным, доказано, что связывание антинейтрофильных антител с соответствующими мишенями на активированных гранулоцитах приводит к их преждевременной дегрануляции. Это нарушает трансэндотелиальную миграцию лейкоцитов из сосудистого русла и приводит к образованию воспалительной гранулемы, составляющей основу морфологической картины гранулематозных васкулитов.
Редко встречающиеся атипичные варианты АНЦА отмечаются при язвенном колите (70%), болезни Крона (10%), аутоиммунном гепатите (50%), первичном склерозирующем холангите (40%), первичном биллиарном циррозе (5%), и васкулитах при ревматоидном артрите (5-10%).
С помощью метода иммунофлюоресценции отмечается два основных типа свечения АНЦА – цитоплазматический (цАНЦА) и перинуклеарный (пАНЦА), которые зависят от клеточных мишеней нейтрофильных антитител, поэтому имеет важное значение в постановке диагноза. По аналогии с выявлением АНФ, при флюоресцентной микроскопии для обнаружения АНЦА можно отметить несколько типов свечения цитоплазмы клеток. Каждому из типов свечения соответствуют свои антигенные мишени. Для описания типов свечения обычно используются сокращения – цАНЦА и пАНЦА. Кроме того, могут выявляться нетипичные варианты антинейтрофильных антител.
При цитоплазматическом типе свечения (цАНЦА) основным антигеном является протеиназа 3 (ПР-3), реже причиной становятся антитела к другим ферментам гранул, прежде всего белку BPI (см. описание панель антигенов антинейтрофильных антител). При выявлении перинуклеарного типа иммунофлюоресценции (пАНЦА), несколько чаще выявляются антитела против миелопероксидазой (МПО) – основного микробицидного фермента азурофильных гранул, генерирующим кислородные радикалы. Реже выявляются антитела к другим ферментам нейтрофильных гранул, таких как лактоферрин, эластаза и каптепсин G. Кроме того, при исследовании антинейтрофильных антител нередко выявляются высокие титры антинуклеарного фактора, что требует уточнения серологического спектра с помощью дополнительных тестов (см. описание тестов антинуклеарный фактор, антинуклеарные антитела, иммуноблот антинуклеарных антител).
Для повышения чувствительности серологического обследования пациентов с системными васкулитам действующие международные рекомендации требуют одновременного использования иммунофлюоресцентного теста, а также выявления антител к протеиназе 3 (код 01.02.15.140) и антител к миелопероксидазе (код 01.02.15.135).
Подготовка к исследованию:
Специальная подготовка не требуется. Рекомендуется забор крови не ранее чем через 4 часа после последнего приема пищи.
Показания к назначению теста :
Ранняя диагностика и дифференциальная диагностика системных васкулитов
Диагностика лимитированной и системной формы гранулематоза Вегенера
Диагностика болезни Чарга-Страусса;
Диагностика микроскопического полиангиита;
Диагностика быстропрогрессирующего гломерулонефрита и острой почечной недостаточности;
Диагностика рентгенологических изменений (образований и каверн в легких);
Диагностика геморрагического альвеолита
Диагностика и дифференциальная диагностика воспалительных заболеваний кишечника
Диагностика первичного склерозирущего холангита
Дифференциальная диагностика полинейропатии
Для диагностики поражения почек и легких целесообразно использовать выявление АНЦА совместно с определением антител к базальной мембране клубочка (тест 01.02.15.085). В диагностике АНЦА-ассоциированных васкулитов международные рекомендации по тестированию и интерпретации результатов тестов для выявления АНЦА (Savige J., Am J Clin Path, 2003) требуют одновременного тестирования АНЦА с помощью иммунофлюоресценции, а также антител к протеиназе 3 (код 01.02.15.140) и миелопероксидазе (01.02.15.135)
Материал для исследования: сыворотка крови.
Метод определения: реакция непрямой иммунофлюоресценции с нейтрофилами человека.
Сроки исполнения: 5 рабочих дней
Единицы измерения: титр.
Референсные значения:<1:40
Интерпретация:
Результатом определения АНЦА является титр, представляющий собой значение конечного разведения сыворотки при котором сохраняется значимая флюоресценция ядра. Чем выше знаменатель дроби, тем больше разведение сыворотки, тем больше антител в сыворотке больного. Высокие титры разведения сыворотки отражают высокую аффинность и концентрацию аутоантител.Отсутствие диагностических титров антинейтрофильных антител значительно снижает вероятность гранулематоза Вегенера и других АНЦА-ассоциированных васкулитах, однако может отмечаться при лимитированных формах этого заболевания.
Повышенный титр антинейтрофильных цитоплазматических антител (АНЦА) указывает на вероятный диагноз гранулематозного васкулита или воспалительного заболевания кишечника. Выявление антител к цитоплазме человека с помощью метода непрямой флюоресценции позволяет подтвердить клинический диагноз АНЦА-ассоциированного васкулита, прежде всего гранулематоза Вегенера и микроскопического полиангиита. При синдрома Чарга-Страусса антинейтрофильные антитела отмечаются в 40-50% случаев. Кроме того, выявление антинейтрофильных цитоплазматических антител подтверждает диагноз неспецифического язвенного колита и ассоциированного с ним первичного склерозирующего холангита. Антитела могут отмечаться при аутоиммунном гепатите. Обнаружение антинейтрофильных цитоплазматических антител с помощью непрямой иммунофлюоресценции требует дообследования, включающего определение антител к миелопероксидазе, антител к протеиназе-3 или панели антигенов антинейтрофильных антител (см.описание тестов). Так как далеко не все мишени АНЦА хорошо охарактеризованы, антигенная специфичность АНЦА может быть установлена не во всех сыворотках, содержащих антинейтрофильные антитела, обнаруженные с помощью непрямой иммунофлюоресценции.Для того, чтобы отличить высокие титры антинуклеарного фактора от специфического свечения АНЦА необходимо параллельно тестировать все сыворотки положительные антинейтрофильным антителам в отношении АНФ, что обеспечивает большую специфичность выявления антинейтрофильных аутоантител(код 01.02.15.035).
Определение типа свечения цитоплазмы клетки позволяет получить дополнительную информацию. Так цитоплазматический тип свечения (цАНЦА) является основной разновидностью антинейтрофильных антител в сыворотке больных с гранулематозом Вегенера. При этом заболевании титр антинейтрофильных антител связан его клинической активностью и успешная иммуносупрессивная терапия гранулематоза приводит к снижению содержания антител ниже порога детекции. Перинуклеарный тип флюоресценции отмечается при многих АНЦА-ассоциированных васкулитах и родственных им заболеваниях. Антитела к MПO встречаются у большинства больных идиопатическим некротизирующим васкулитом с полулуниями, микроскопическом полиангиите, реже у больных с синдромом Гудпасчера. Выявление нетипичных вариантов свечения АНЦА используется в диагностике воспалительных заболеваний кишечника. Нетипичные варианты АНЦА описаны при язвенном колите (70%), болезни Крона (10%), аутоиммунном гепатите (50%), первичном склерозирующем холангите (40%), первичном биллиарном циррозе (5%), и васкулитах при ревматоидном артрите (5-10%).
Основная литература:
1. Лапин С.В. Тотолян А.А. Иммунологическая лабораторная диагностика аутоиммунных заболеваний/ Издательство «Человек», СПб - 2010.
2. Насонов Е.Л., Александрова Е.Н. Современные стандарты лабораторной диагностики ревматических заболеваний. Клинические рекомендации / БХМ, М - 2006.
3. Conrad K, Schlosler W., Hiepe F., Fitzler M.J. Autoantibodies in Organ Specific Autoimmune Diseases: A Diagnostic Reference/ PABST, Dresden – 2011.
4. Conrad K, Schlosler W., Hiepe F., Fitzler M.J. Autoantibodies in Systemic Autoimmune Diseases: A Diagnostic Reference/ PABST, Dresden – 2007.
5. Gershvin ME, Meroni PL, Shoenfeld Y. Autoantibodies 2nd ed./ Elsevier Science – 2006.
6. Shoenfeld Y., Cervera R, Gershvin ME Diagnostic Criteria in Autoimmune Diseases / Humana Press – 2008.
7. Инструкции к набору реагентов