Диагностика васкулитов и поражения почек, Антитела к цитоплазме нейтрофилов
Антинейтрофильные цитоплазматические антитела (АНЦА/ANCA) класса IgG (код 01.02.15.010)
Диагностика системных васкулитов и воспалительных заболеваний кишечника
Описание теста:
Антинейтрофильные цитоплазматические антитела (АНЦА) были впервые описаны при гранулематозных васкулитах с поражением почек (Davies, 1982). При системных васкулитах в качестве основных антигенов антинейтрофильных антител выступает ряд ферментов, содержащихся в азурофильных гранулах нейтрофилов. К известным антигенным мишеням АНЦА относятся протеиназа-3, миелопероксидаза, лактоферрин, эластаза, белок BPI и катепсин G. Антинейтрофильные антитела также используются в качестве диагностических маркеров при воспалительных заболеваниях кишечника и нейтропениях, однако при этих заболеваниях антигены аутоантител неизвестны. Метод непрямой иммунофлюоресценции остается «золотым стандартом» выявления антинейтрофильных антител, поскольку позволяет определить как частые антигены (такие как протеиназа 3 или миелопероксидаза), так и редкие мишени аутоантител, которые охарактеризованы недостаточно хорошо.
Высокая встречаемость АНЦА при гранулематозных васкулитах ставит вопрос об их роли патогенезе васкулитов. Появление антител к антигенам нейтрофилов связывают с бактериями, колонизирующими носоглотку (стафилококки), которые производят суперантигены. Кроме того, воспаление приводит к экспрессии антигенов антинейтрофильных антител на поверхности лейкоцитов и эндотелия. Хотя точный механизм индукции АНЦА остается неизвестным, доказано, что связывание антинейтрофильных антител с соответствующими мишенями на активированных гранулоцитах приводит к их преждевременной дегрануляции. Это нарушает трансэндотелиальную миграцию лейкоцитов из сосудистого русла и приводит к образованию воспалительной гранулемы, составляющей основу морфологической картины гранулематозных васкулитов.
Редко встречающиеся атипичные варианты АНЦА отмечаются при язвенном колите (70%), болезни Крона (10%), аутоиммунном гепатите (50%), первичном склерозирующем холангите (40%), первичном билиарном циррозе (5%) и васкулитах при ревматоидном артрите (5-10%).
С помощью метода иммунофлюоресценции отмечается два основных типа свечения АНЦА – цитоплазматический (цАНЦА) и перинуклеарный (пАНЦА), которые зависят от клеточных мишеней нейтрофильных антитител, поэтому имеют важное значение в постановке диагноза. По аналогии с выявлением АНФ, при флюоресцентной микроскопии для обнаружения АНЦА можно отметить несколько типов свечения цитоплазмы клеток. Каждому из типов свечения соответствуют свои антигенные мишени. Для описания типов свечения обычно используются сокращения – цАНЦА и пАНЦА. Кроме того, могут выявляться нетипичные варианты антинейтрофильных антител.
При цитоплазматическом типе свечения (цАНЦА) основным антигеном является протеиназа-3 (ПР-3), реже причиной становятся антитела к другим ферментам гранул, прежде всего белку BPI (см. описание панели антигенов антинейтрофильных антител). При выявлении перинуклеарного типа иммунофлюоресценции (пАНЦА) несколько чаще выявляются антитела против миелопероксидазы (МПО) – основного бактерицидного фермента азурофильных гранул, генерирующего кислородные радикалы. Реже выявляются антитела к другим ферментам нейтрофильных гранул, таких как лактоферрин, эластаза и каптепсин G. Кроме того, при исследовании антинейтрофильных антител нередко выявляются высокие титры антинуклеарного фактора, что требует уточнения серологического спектра с помощью дополнительных тестов (см. описание тестов антинуклеарный фактор, антинуклеарные антитела, иммуноблот антинуклеарных антител).
Для повышения чувствительности серологического обследования пациентов с системными васкулитам действующие международные рекомендации требуют одновременного использования иммунофлюоресцентного теста, а также выявления антител к протеиназе-3 (код 01.02.15.140) и антител к миелопероксидазе (код 01.02.15.135).
Подготовка к исследованию:
Специальная подготовка не требуется. Рекомендуется забор крови не ранее, чем через 4 часа после последнего приема пищи.
Показания к назначению теста:
1. Ранняя диагностика и дифференциальная диагностика системных васкулитов;
2. Диагностика лимитированной и системной формы гранулематоза Вегенера;
3. Диагностика болезни Чарга-Страусса;
4. Диагностика микроскопического полиангиита;
5. Диагностика быстропрогрессирующего гломерулонефрита и острой почечной недостаточности;
6. Диагностика рентгенологических изменений (образований и каверн в легких);
7. Диагностика геморрагического альвеолита;
8. Диагностика и дифференциальная диагностика воспалительных заболеваний кишечника;
9. Диагностика первичного склерозирущего холангита;
10. Дифференциальная диагностика полинейропатий.
Для диагностики поражения почек и легких целесообразно использовать выявление АНЦА совместно с определением антител к базальной мембране почечного клубочка (тест 01.02.15.085). В диагностике АНЦА-ассоциированных васкулитов международные рекомендации по тестированию и интерпретации результатов тестов для выявления АНЦА (Savige J. etal., 2003) требуют одновременного тестирования АНЦА с помощью иммунофлюоресценции, а также антител к протеиназе-3 (код 01.02.15.140) и миелопероксидазе (01.02.15.135).
Материал для исследования: сыворотка крови.
Метод определения: реакция непрямой иммунофлюоресценции с нейтрофилами человека.
Сроки исполнения: 5 рабочих дней.
Единицы измерения: титр.
Референсные значения: <1:40.
Интерпретация:
Результатом определения АНЦА является титр, представляющий собой значение конечного разведения сыворотки при котором сохраняется значимая флюоресценция ядра. Чем выше знаменатель дроби, тем больше разведение сыворотки, тем больше антител в сыворотке больного. Высокие титры разведения сыворотки отражают высокую аффинность и концентрацию аутоантител. Отсутствие диагностических титров антинейтрофильных антител значительно снижает вероятность гранулематоза Вегенера и других АНЦА-ассоциированных васкулитов, однако может отмечаться при лимитированных формах этого заболевания.
Повышенный титр антинейтрофильных цитоплазматических антител (АНЦА) указывает на вероятный диагноз гранулематозного васкулита или воспалительного заболевания кишечника. Выявление антител к цитоплазме человека с помощью метода непрямой флюоресценции позволяет подтвердить клинический диагноз АНЦА-ассоциированного васкулита, прежде всего, гранулематоза Вегенера и микроскопического полиангиита. При синдроме Чарга-Страусса антинейтрофильные антитела отмечаются в 40-50% случаев. Кроме того, выявление антинейтрофильных цитоплазматических антител подтверждает диагноз неспецифического язвенного колита и ассоциированного с ним первичного склерозирующего холангита. Антитела могут отмечаться при аутоиммунном гепатите. Обнаружение антинейтрофильных цитоплазматических антител с помощью непрямой иммунофлюоресценции требует дообследования, включающего определение антител к миелопероксидазе, антител к протеиназе-3 или панель антигенов антинейтрофильных антител (см. описание тестов). Так как далеко не все мишени АНЦА хорошо охарактеризованы, антигенная специфичность АНЦА может быть установлена не во всех сыворотках, содержащих антинейтрофильные антитела, обнаруженные с помощью непрямой иммунофлюоресценции. Для того, чтобы отличить высокие титры антинуклеарного фактора от специфического свечения АНЦА, необходимо параллельно тестировать все сыворотки положительные по антинейтрофильным антителам в отношении АНФ, что обеспечивает большую специфичность выявления антинейтрофильных аутоантител (код 01.02.15.035).
Определение типа свечения цитоплазмы клетки позволяет получить дополнительную информацию. Так, цитоплазматический тип свечения (цАНЦА) является основной разновидностью антинейтрофильных антител в сыворотке больных с гранулематозом Вегенера. При этом заболевании титр антинейтрофильных антител связан с его клинической активностью, и успешная иммуносупрессивная терапия гранулематоза приводит к снижению содержания антител ниже порога детекции. Перинуклеарный тип флюоресценции отмечается при многих АНЦА-ассоциированных васкулитах и родственных им заболеваниях. Антитела к MПO встречаются у большинства больных идиопатическим некротизирующим васкулитом с полулуниями, микроскопическом полиангиитом, реже у больных с синдромом Гудпасчера. Выявление нетипичных вариантов свечения АНЦА используется в диагностике воспалительных заболеваний кишечника. Нетипичные варианты АНЦА описаны при язвенном колите (70%), болезни Крона (10%), аутоиммунном гепатите (50%), первичном склерозирующем холангите (40%), первичном билиарном циррозе (5%) и васкулитах при ревматоидном артрите (5-10%).
Основная литература:
1. Лапин С.В. Тотолян А.А. Иммунологическая лабораторная диагностика аутоиммунных заболеваний. Издательство«Человек», СПб- 2010.
2. Tietz Clinical guide to laboratory tests. 4-th ed. Ed. Wu A.N.B.- USA,W.B Sounders Company, 2006,1798 p.
3. Wildemann B. et al. Laboratory Diagnosis in Neurology / Thieme, New York 2010, 271p.
4. Conrad K., Schlosler W., Hiepe F., Fitzler M.J. Autoantibodies in Organ Specific Autoimmune Diseases: A Diagnostic Reference/ PABST, Dresden – 2011.
5. Conrad K., Schlosler W., Hiepe F., Fitzler M.J. Autoantibodies in Systemic Autoimmune Diseases: A Diagnostic Reference/ PABST, Dresden – 2007.
6. Gershvin M.E., Meroni P.L., Shoenfeld Y. Autoantibodies 2nd ed./ Elsevier Science – 2006.
7. Shoenfeld Y., Cervera R., Gershvin M.E. Diagnostic Criteria in Autoimmune Diseases / Humana Press – 2008.