АУТОАНТИТЕЛА ПРИ АУТОИММУННЫХ ПРОЦЕССАХ

С иммунологической точки зрения, «аутоантитело» представляет собой способностью иммуноглобулины человека, способные специфически связываться с антигенными эпитопами молекул собственного организма. Несмотря на простоту и очевидность такое определение часто оказывается весьма далеким от истины. Так аутоиммунные реакции, которые приводят к синтезу аутоантител, не всегда направлены против собственных аутоантигенов. Иммунный ответ, который лежит в основе этой реакции, направлен на антигены вирусов, бактерий, экзогенных веществ, а эпитопы собственных молекул становится мишенями лишь в силу антигенного сходства. Таким образом, сложно точно отделить аутоиммунный ответ от естественных реакций иммунной системы.

Кроме того, для выявления аутоантител в лаборатории в большинстве случаев используются антигены, отличающиеся от антигенов человеческа происхождения. Так в качестве антиген-содержащего субстрата применяются ткани или очищенные антигены животных, перевиваемые клеточные линии и рекомбинантные белки, полученные на основании человеческих генов в различных системах экспрессии белка. По своей антигенной структуре рекомбинантные антигены значимо отличаются от нативных белков тканей человека. Это обусловлено своей третичной структурой, гликозилированием, а также присутсвием аминокислотных последовательностей для эффективного синтеза белка и его очистки. Поэтому одновременно с «аутоантителами» в иммунологических методах часто выявляются реакции иммуноглобулинов с чужеродными эпитопами.

Более совершенным подходом при выявлении аутоантител является использование модельных «дизайнерских» антигенов, структура которых основана на изучении иммунодоминантных эпитопов аутоантигенов человека. В этом случае они могут сильно отличаться от исходных мишеней. Наиболее революционным примером является создание циклического цитруллинированного пептида для диагностики ревматоидного артрита. Используемый в качестве антигена цитруллиновый пептид, был выбран в ходе скрининга случайных пептидных библиотек, которые не имели ничего общего с исходной последовательность белка филлагрина, изучение которой позволило установить характеристики иммунодоминантного эпитопа антицитруллиновых антител. Для создания тест-системы с все шире используются рекомбинантные модельные белки, аминокислотная последовательность которых состоит из чередования иммунодоминантных эпитопов антигена. В этом случае серологическая реакция иммуноглобулина человека с таким «модельным» исскуственным антигеном уже не является аутоантителом в полном смысле этого слова. В связи с этим, термин «аутоантитело» подразумевает определенную «серологическую реакцию» присущую тому или другому аутоиммунному заболеванию. Результат этой серологической реакции зависит от используемого лабораторного метода, каждый из которых имеет свои особенности и ограничения.

Благодаря тому, что аутоантитела связываются с молекулами сходной структуры или молекулами в составе одной ткани, клетки, органеллы или молекулярного комплекса их делят на семейства. В большинстве случаев АИЗ, сопровождающиеся аутоантителами одного семейства, имеют сходную клиническую симптоматику и патогенез, но выявление конкретных антигенных специфичностей указывает на особенности в клинической картине и течении аутоиммунных заболеваний. К основным семейства аутоантител относят антинуклеарные антитела (АНА), антитела к цитоплазме нейтрофилов (АНЦА), антифосфолипидные антитела (АФА), антицитруллиновые антитела (АЦА), антимитохондриальные антитела (АМА).

Например, семейство антитела к антигенам цитоплазмы нейтрофилов направлены на разнородные по структуре и свойства белки гранул цитоплазмы лейкоцитов. В то же время, большинство конкретных разновидностей аутоантител этого семейства встречаются при системных васкулитах.

Однако прямое участие аутоантител в развитии патофизиологических процессах, характерных для данного АИЗ, не всегда представляется доказанным. В таком случае принято говорить об аутоантителах как «свидетелях» иммунологических реакций.

Большинство разновидностей аутоантител сравнительно часто могут быть обнаружены у клинически здоровых лиц. К аутоантителам, которые могут быть случайной находкой у клинически здоровых лиц, относят антинуклеарный фактор (3%), ревматоидный фактор (3%), антитела к тиреопероксидазе (4%), антитела к кардиолипину (1%), антитела к миокарду (5%), антитела к скелетной мышце (3%). Синтез низкоаффинных аутоантител в норме контролируется популяцией В-1 (CD5+) клеток. Встречаемость многих аутоантител нарастает с возрастом, аутоантитела появляются на фоне инфекций, травмы и новообразованиях, которые не сопровождаются аутоиммунными проявлениями. В этом случае аутоантитела могут нести самостоятельную иммунную функцию, например, участвовать в клиренсе молекул ткани. Антинуклеарный фактор часто отмечается при болезни трансплантат против хозяина и солидных опухолях, что можно объяснить аллоиммунным или противоопухолевым иммунным ответом.

Высокое содержание аутоантител не всегда сопровождаться высокой клинической активностью АИЗ. Так ряд больных с СКВ имеют высокие титры аутоантител к дсДНК, однако поражения почек у них нет. Это указывает на то, что ряд характеристик аутоантител, в том числе аффинность, количество, присутствие тканевого воспаления и других реакций иммунной системы крайне важны для проявления патогенетического действия аутоантител. С другой стороны, при АИЗ может наблюдаться ситуация при которой антитела постепенно исчезают из сыворотки увеличением длительности болезни. Так антитела к островковым клеткам поджелудочной железы у большинства больных сахарным диабетом 1 типа исчезают через 1 год после клинического дебюта заболевания.

Появление аутоантител обычно в высоких титрах на фоне АИЗ указывает на участие аутоантител в механизмах аутоиммунной реакции. Для доказательства принципиальной роли аутоантител при АИЗ необходимо соблюдение ряда формальных условий. Так предполагается, что в пораженной ткани можно обнаружить совместно иммунные комплексы аутоантитела и соответствующего аутоантигена. При моделировании заболевания на экспериментальных животных сыворотка из организма больного животного или человека, перенесенное здоровому животному или аутоантитело, полученное иммунизацией аутоантигеном, приводит к изменению структуры и функции, схожим с таковыми при оригинальном АИЗ. Аутоантитело должно оказывать действие на клетки клеточных культур или изолированной ткани exvivo. И наконец, должна существовать корреляция титров аутоантитела и активности заболевания. Далеко не для всех аутоантител могут быть выполнены все эти требования. Изученные механизмы участия аутоантител в иммунопатогенезе АИЗ приведены в таблице.

В патогенезе аутоиммунных заболеваний (АИЗ) принимают участие все механизмы иммунитета, включая врожденные и приобретенные (как гуморальные, так и клеточные). На сегодняшний день клинически оправданных методов оценки клеточных ответов не существует. Выявление аутоантител, т.е. серологические методы, являются основными в диагностике АИЗ.

Хотя аутоантитела в большинстве случаев являются надежными маркерами АИЗ и принимают участие в патогенезе АИЗ, однако некоторые их разновидности сравнительно часто могут быть обнаружены у здоровых лиц. К аутоантителам, которые могут быть случайной находкой у клинически здоровых лиц относят антинуклеарный фактор (3%), ревматоидный фактор (3%), антитела к тиреопероксидазе (4%), антитела к кардиолипину (1%), антитела к миокарду (5%), антитела к скелетной мышце (3%). Поэтому при диагностике аутоиммунных болезней большое значение имеет чувствительность и специфичность конкретного теста. Чувствительность определяет, как часто антитела встречаются у лиц с заболеванием. Специфичность, наоборот, определяет насколько редко антитела встречаются при других болезнях. Так, например, если специфичность равна 90%, то это указывает на то, что каждый 10-й тест будет ложноположительным. Более чувствительные тесты целесообразно использовать при скрининге (т.е. ранней диагностике) заболеваний, более специфичные - при подтверждении диагноза (т.е.дифференциальной диагностике).

Антитела в лабораториях определяют несколькими методами, прежде всего непрямой иммунофлюоресценцией (нРИФ), методом иммуноферментного анализа (ИФА), иммуноблоттингом. Метод непрямой иммунофлюоресценции  является наилучшим для определения антител к нерасворимым тканевым антигенам, кроме того, в одном тесте можно определить антитела к нескольким мишеням, что делает его оптимальным методом для скрининга аутоантител. Если точно охарактеризован антиген, с которым связывают аутоантитела, то используется метод иммуноферментного анализа (ИФА) или иммуноблоттинг (ИБ).

Аутоантитела представлены белками-иммуноглобулинами, направленными против собственных антигенов организма. Содержание аутоантител и иммуноглобулинов обычно снижается при назначении иммуносупрессивной терапии и при хорошем ответе на лечение. Однако, иммуноглобулины весьма стабильны и время полураспада молекул в организме составляет около 1 месяца. В связи с этим повторные серологические обследования для обнаружения аутоантител целесообразно проводить не чаще чем раз в 1-2 месяца.

Для мониторирования лечения АИЗ с системным воспалением обычно используется выявление показателей острофазового ответа, таких как СОЭ и СРБ. При назначении стероидных гормонов концентрация СРБ значимо снижается уже в конце 1 недели после начала терапии, в то время как СОЭ снижается в течении полумесяца.

Разные аутоиммунные процессы имеют общую симптоматику, кроме того, могут быть обнаружены у одного пациента. При системных ревматических заболеваниях, аутоиммунных поражениях печени, аутоиммунных эндокринопатиях нередко отмечаются перекрестные синдромы. Комбинированное выявление аутоантител важно для диагностики таких состояний.