Антитела к Saccharomyces cerevisiae (ASCA) и другие антигликановые АТ при воспалительных заболеваниях кишечника
Химический термин «гликан» используется для молекул, несущих гликозидную связь, включая -моно,-олиго, -полисахариды или углеводы (DotanN, AltstockRT, SchwarzM, DuklerA. 2006). Гликаны являются основными структурными блоками поверхностей эритроцитов, иммунных клеток, микроорганизмов, что приводит к генерации многих антигликановых антител классов IgG, IgA, IgE и IgM, что было продемонстрировано при многих воспалительных и аутоиммунных заболеваниях (DotanI, FishmanS, DganiY, etal 2006). Используя технологию GlycoChip (SchwarzM, SpectorL, GargirA, etal2003; SchwarzM, SpectorL, GortlerM, et al 2006) и метод ИФА были описаны три новых антигликановых антител Dotan at al (2006). (Dotan I, Fishman S, Dgani Y, et al 2006; Dotan N, Altstock RT, Schwarz M, Dukler A. 2006). В состав панели входит четыре биомаркера: анти-хитобиозид IgA (АССА), анти-ламинарибиозид IgG (AЛКA), анти-манобиозид IgG (АМКА) (табл 1). Четвертый компонент IBDXTM панели- это ASCA IgG, которые соответствуют первому описанному антигликановому серологическому биомаркеру ВЗК.
Маннобиозид (АМКА) - это димер 1,3 связанной маннозы и компонент маннана от патогенных грибков и дрожжей (Peyrin-BirouletL, Standaert-VitseA, BrancheJ, et al 2007). Ламинарибиозид (АЛКА) - это строительный блок ламинарин, полисахарид из бета-1-3 гликанов и найден в клеточной стенках грибов, дрожжей и водорослей (DotanI, FishmanS, DganiY, etal 2006, FerranteM, HenckaertsL, JoossensMetal 2007). Хитобиозид (АССА) - это компонент хитина, найденный в кутикуле насекомых и клеточных стенок инфекционных патогенов таких, как бактерии и дрожжи (DotanI, FishmanS, DganiY, etal 2006). Как молекулы бета-1-3 гликанов, так и хитина модулируют ответ иммунной системы, связываясь с рецепторами на нейтрофилах, макрофагах и натуральных киллерах, что стимулирует клеточную пролиферацию, фагоцитоз и секрецию цитокинов (PangZ, OtakaK, MaokaT, etal2005). Подобно ASCA (PappM, AltorjayI, NormanGL, etal2007;DevlinSM, YangH, IppolitiA, etal2007; DassopoulosT, NguyenGC, BittonA, etal2007) новые антигликановые антитела ассоциируются с простым нуклеотидным полиморфизмом (SNPs) ВЗК чувствительных генов.
Для первоначального изучения ценности всех трех новых маркеров было обследовано 194 пациента с БК, 162 с ЯК и 142 здоровых людей. Результаты показали, что все три маркера могут быть использованы для диагностики БК (DotanI, FishmanS, DganiY, etal 2006). Примерно треть больных БК были позитивны по одному из 3 маркеров (DotanI, FishmanS, DganiY, etal 2006). Важно отметить, что 44% (12/27) негативных по ASCA пациентов оказались позитивными по АЛКА или АССА. Поэтому при невысокой частоте выявления каждого из новых биомаркеров, определяемые совместно они оказались важным дополнением к выявлению ASCA. У больных, которые были позитивны по одному из трех маркеров, чувствительность и специфичность тестирования для диагноза БК оказалась 77,4% и 90.6% соответственно. У пациентов, положительных по двум или трем антителам, специфичность увеличивалась до 99,1%. Высокие уровни АЛКА и АМКА сочетались с вовлечением в процесс тонкого кишечника.
Продукция антител, направленных против гликанов и хитина, и их связь с БК также подтверждает особенности нарушения толерантности иммунной системы при этом заболевании. Однако индивидуальное различие в выработке различных антигликановых антител (ASCA, АЛКА, АМКА и АССА) еще до конца не установлено.Так в исследовании диагностической ценности антигликановых антител, опубликованном Henckaertsetal (2007) (HenckaertsL, PierikM, JoossensM, FerranteM, et. al. 2007), оценивалось влияние мутаций в некоторых генах врожденных иммунных рецепторов на появление анти-гликановых и анти-ОмрС антител при ВЗК, включая NOD2/CARD15, NOD1/CARD4, TUCAN/CARDINAL/CARD8, Toll-likereceptor (TLR) 4, TLR2, TLR1 и TLR6. В это исследование были включено 1163 пациентов с ВЗК (874 БК, 259 ЯК и 30 НК) и 312 здоровых контрольных лиц. Больные БК имели, по крайней мере, один NOD2/CARD15 вариант: 1) который встречался более часто у ASCA или АЛКА позитивных больных, чем у больных без мутации (ASCA 66.1% против 51.5%, р=0.0001; АЛКА 43.3% против 34.9%, р=0.018); 2) при этом были выше титры ASCA (85.7 У.ед ИФА против 51.8 У.ед. ИФА, р<0.0001). Эта ассоциация была независимой от вовлечения подвздошной кишки. Важно подчеркнуть, что было установлено дозозависимое влияние гена NOD2/CARD15 при сравнении позитивности по антигликановым антителам у пациентов с БК и имеющих 0, 1 и 2 копий NOD2/CARD15.
Антигликановая позитивность становилась более частой, когда число NOD2/CARD15 копий мутантного аллеля гена выше (HenckaertsL, PierikM, JoossensM, FerranteM, etal2007). Такой же дозозависимый эффект был подтвержден Papp et al в 2008 году (PappM, AltorjayI, DotanN, etal, 2008). Они проанализировали связь антигликановых антител с NOD2/CARD15 вариантами при изучении 557 больных с БК, 95 с ЯК и 100 здоровых лиц. При сравнении больных с NOD2/CARD15 мутантными аллелями с теми, кто имел обычный (дикий) тип аллелей, позитивность для ASCA была 65.2% против 41.% (р<0.0001), АМКА 18.8% против 9.7% (р=0.009) и у любого анти-гликана 72.5% против 52.5% (р<0.0001). В исследовании Papp etal (2008) был продемонстрирован также дозозависимый эффект копийности гена NOD2/CARD15 на АМКА и другие антигликановые антитела.
Ferrante et al (FerranteM, HenckaertsL, JoossensMetal 2007) опубликовали результаты 1225 больных ВЗК (913 БК, 272 ЯК, 40 ИК) и 200 этнически гомогенной контрольной группы и 113 больных с воспалением кишечника другой причины (дивертикулит, инфекционный колит, ишемический колит, псевдомембранозный колит). Помимо IBDX панели (АССА, АЛКА, АМКА и ASCA) были использованы антитела к фактору патогенности-ОмрС. В данном исследовании 76% больных с БК оказались позитивными, по меньшей мере. по одному из этих маркеров. Все анти-гликановые антитела и анти-ОмрС антитела были высокоспецифичны для БК (80.5%-93%). Чувствительность для ASCA оказалась равной 56.4%, для АЛКА 17.7%, для АССА 20.7%, для АМКА 28.1% и для анти-ОмрС 29.1%. Среди всех 913 больных только 13 (1.4%) были позитивны по всем пяти маркерам. Среди 50% пациентов (п=435), которые были ASCA негативны /ОмрС позитивны (п=93) или ASCA позитивны/ОмрС негативны (п=342), каждый оказался позитивным, по крайней мере, по одному из антигликановых маркеров. Среди 67 % ASCA/ОмрС-позитивных пациентов они были также позитивными, по крайней мере, по одному из других антигликановых антител. Из 305 ASCA/ОмрС негативных пациентов 7% были ASCA позитивными, 12% АССА позитивными и 13% АМКА позитивными. Хотя добавление АЛКА(ASCA/АНКА/АЛКА комбинции) приводило к небольшому улучшению в дифференциальной диагностике БК и ЯК сравнительно с классическим применением комбинации ASCA/АНЦА, но это значительно увеличивало точность дифференциации ВЗК от здорового контроля и не-ВЗК интестинального воспаления. Повышенные уровни всех 5 маркеров (ASCA, АЛКА, АССА, АМКА и ОмрС) были значимо связано с осложненным течением болезни: с ростом числа стриктур, фистул и необходимости оперативного лечения.
Сходные с Ferranteetal. (2007) результаты были получены Pappetal (PappM, AltorjayI, DotanN, etal2008) в исследовании, включавшем 557 пациентов с БК, 95 с ЯК и 100 здоровых лиц. Всего 66.2% больных с БК были позитивны, по крайней мере, по одному из 5 биомаркеров, включавших ASCA, АЛКА, АССА, АМКА и анти-ОмрС, все из которых были высоко специфичны для БК (79%-100% специфичности). Чувствительность для каждого из 5 маркеров составила для ASCA 50.4%, АЛКА 15.2%, АССА 11.3%, АМКА 11.5% и анти-ОмрС 31.2%. Для АЛКА, АССА и АМКА чувствительность оказалась ниже, чем в большинстве других исследований (DotanI, FishmanS, DganiY, etal 2006; DotanN, AltstockRT, SchwarzM, DuklerA. 2006 FerranteM, HenckaertsL, JoossensMetal 2007, SimondiD, MengozziG, BettetoS, etal2008). В целом, повышенный уровень всех маркеров был вновь ассоциирован с осложненным теченим заболевания и повышенной частотой хирургического вмешательства. Среди больных с БК обнаружение ASCA и АЛКА было ассоциировано с ранним началом заболевания в более молодом возрасте (р<0.0001 и р =0.0012 соответственно), в то время как ASCA были ассоциированы с перианальной болезнью (р<0.0001) и использованием азатиоприна (р=0.016). Однако не было найдено связи между серологическими маркерами и полом, семейной предрасположенностью, привычками курения и экстраинтестинальными проявлениями заболевания.
В двух больших медицинских академических центрах в Канаде было обследовано 818 пациентов с ВЗК (517 БК и 301 ЯК) со средним возрастом 33 и 39 лет соответственно, с длительностью заболевания 8.9 лет. Больные были фенотипированы согласно Монреальской классификации, и у них были проанализированы семь антигликановых антител (ASCA IgG, ASCA IgA, АССА, АЛКА, АМКА, анти-Л (антиламинариновые антитела) и анти-С (антихитиновые антитела) и пАНЦА В результате в БК популяции 73% были позитивны по >/=1 антигликановому антителу. Все антигликановые маркеры были специфичны для БК (85.4-97.7%), а не для больных с ЯК (P<0.0015). ASCA IgGи IgAпозволяли лучше дифференцировать БК от ЯК, а вслед за ними следовали антиламинариновые антитела (зоны под кривой 0.818, 0.815 и 0.702, соответственно ). Добавление анти-Л и анти-Cк ASCA IgGи пАНЦА улучшало дифференциальную диагностику между БК и ЯК (P<0.001). Увеличенное число положительных антител сочеталось с ранним началом заболевания, пенетрациями, перианальными проявлениями и необходимостью хирургического вмешательства (P<0.001). Выявление анти-Л сочеталось с илеоколитом при БК (oddsratio(OR) 2.28, 95% confidence interval (CI) 1.40-3.69; P=0.001), а выявление анти-С с появлением пенетраций (OR2.75, 95% CI1.50-5.04; P=0.001) и перианальных проявлений (OR1.95, 95% CI1.06-3.59; P=0.03). Таким образом, определение анти-Л и анти-С улучшало проведение дифференциального диагноза между БК и ЯК. Анти-Л также помогали дифференцировать между изолированным БК колитом и ЯК. Выявление антиламинариновых и антихитиновых антител независимо сочеталось с более агрессивным фенотипом течения заболевания (SeowCH, StempakJM, XuW., etal 2009).
Сывороточные образцы 149 пациентов с БК из регистра ВЗК были протестированы на наличие анти-ламинариновых IgA (анти-Л), анти-хитиновых IgA (анти-C), АССА IgA, АЛКА IgG, АМКА IgG и ASCA методом ИФА (IBDX(R) панель Glycominds, Lod, Israel). Учитывались клинические данные по распространенности осложнений, хирргическим вмещательствам, активности заболевания, данные относительно начала и локализации воспалительного процесса. Средний период наблюдения без предшествующих осложнений или хирургии во время забора образца составлял 53.7 месяцев. В целом, в 26.3% наблюдений развились осложнения, и 17.1% больных были подвергнуты хирургическому вмешательству соответственно. Позитивность для ASCA, АМКА, АССА и анти-Л в отдельности или растущая частота позитивных сывороточных антител независимо предсказывали быструю прогрессию в направлении более тяжелого течения заболевания. Осложнения или хирургические вмешательства наблюдались только у лиц с позитивностью для анти-Л или для более, чем 3 маркеров из всей панели, что указывало на прогрессию заболевания до хирургии или осложнений. Серологический статус оставался стабильным у большинства больных во времени. (RiederF, SchlederS, WolfA, etal., 2009).В другой работесотрудники этой же лаборатории Университета Регенсбурга (Германия) протестировали панель новых серологичеcких анти-гликановых антител, включая анти-ламинариновые (анти-Л) и анти-хитиновые IgA (анти-С) углеводные антитела, а также АССА, АЛКА, АМКА и ASCA в образцах сывороток от 824 пациентов (363 БК, 130 ЯК, 74 с другими гастроинтестинальными заболеваниями и 257 c невоспалительными заболеваниями кишечника в качестве контроля) немецкого регистра ВЗК с помощью ИФА и АНЦА методом иммуннофлюоресценции. Все 77.4% больных с БК оказались положительны, по меньшей мере, по одному из антигликановых антител. Причем ASCA или комбинация ASCA/пАНЦА оставалась наиболее точной для диагностики БК. Комбинированное использование антител улучшало возможность проведения дифференциального диагноза между БК и ЯК и выявлению осложненного течения заболевания (RiederF, SchlederS, WolfA, etal 2010).
Следует сказать, что диагностическая ценность антигликановых антител оспаривается рядом авторов. Так в сообщении Simondi et al (SimondiD, MengozziG, BettetoS, etal2008) указывается, что в то время как уровень ASCA коррелировал с вовлечением подвздошной кишки и развитием пенетрации или стриктуры, то уровень АЛКА, имея сходные тенденции, не достиг статистической разности (р=0.07 и р=0.09 соответственно). Это противоречие может быть связано с малым объемом больных в работе Simondi D., которое включало всего 265 субъектов (116 БК, 53 ЯК, 51 здоровый и 45 с другими болезнми кишечника).
Важно заметить, что в работе Simondi D. (SimondiD, MengozziG, BettetoS, etal2008) среди БК пациентов АМКА встречались чаще у женщин и у курящих, чем у мужчин (р=0.02) и у некурящих (р=0.03), а также больные с БК имели, по меньшей мере, одного больного родственника первой степени родства со значимо более высоким уровнем АЛКА, чем у лиц без семейных случаев заболевания (59.8% против 34.7%, р=0.0005), подтверждая семейную ассоциацию заболевания БК с обнаружением АЛКА.
Синтетические маннозные антитела
Существование нового подкласса антигликановых антител было открыто Vanderwalle-E1 Khoury et al (Vandewalle-El, KhouryP, ColombelJF, JoossensS, et al 2008), которые синтезировали два основных олигоманнозных эпитопа: Ман альфа-1,3 Ман-альфа 1,2 (Ман3) и Ман альфа -1,3 Ман альфа -1,2. Ман альфа-1,2 (Ман 4), базируясь на химической структуре маннозных эпитопов для ASCA. Антитела против маннозных остатков (Ман 3 и Ман 4- АМАН) изучены у 1365 пациентов с ВЗК (772 БКБ 261 ЯК, 43 НК и у 289 контрольных субъектов). В то время как специфичность АМАН для БК была сходной с ASCA (89% против 93%), но чувствительность оказалась невысокой (38% против 55%). Всего 16% больных с БК были позитивны как для ASCA, так и АМАН, и 24% были позитивны для Ман 4- АМАН. Следует отметить, что 11% ASCA негативных больных были АМАН позитивными (5% для Ман 3, 4% для Ман 4 и 2% для обоих тестов). Всего 24% больных БК, которые были негативны как для ASCA так и /или других БК - ассоциированных серологических биомаркеров были позитивны для АМАН, подтверждая, тем самым, существование нового подвида анти-маннозных антител, присутствующих у больных с БК (Vandewalle-ElKhouryP, ColombelJF, JoossensS, etal2008). Можно прийти к заключению, что комбинация АМАН с ASCA, АССА, АЛКА и АМКА может повысить диагностическую эффективность существующей панели антигликановых биомаркеров.
АМАН были проанализированы по их предсказательному значению для эволюции недифференцированного колита (НК) и для прогноза БК с вовлечением тонкого кишечника. Для этого 20 пациентов НК были прослежены до постановки окончательного диагноза: диагноз БК был установлен в 11, ЯК в 7 и язвенно-подобный- БК в 2 наблюдениях. Среди 11 пациентов с диагнозом БК один был ASCA-положительным/АМАН негативным, 2 были ASCA позитивными /АМАН позитивными, три были ASCA негативными/АМАН позитивными. Никто из больных с ЯК не был АМАН позитивным. Поэтому, по сравнению с ASCA, АМАН показали значительную диагностическую чувствительность (45% против 27%)для предсказания эволюции НК в БК. Хотя позитивность АМАН не имела ассоциации с каким-то определенным «АМАН- фенотипом» заболевания, среди ASCA-негативных пациентов АМАН позитивность значимо ассоциировалась с вовлечением толстой кишки. Можно полагать, что АМАН могут иметь значение для прогноза вовлечения толстой кишки при БК, когда ASCA менее постоянно определяются в этих случаях.
Вероятная роль инфекции Candidaalbicans в появлении антигликановых антител
Антитела против галакто-маннана Saccharomyces cerevisiae (ASCA) и антитела против синтетических дисахаридных фрагментов гликана (ALCA) и хитина (ACCA) являются установленными биомаркерами БК. Ранее было показано, что инфекция Candida albicans способна индуцировать появление ASCA (Martinez-EsparzaM, SarazinA, JouyN, etal.2006). Антитела, направленные против последовательности олигоманнозы alpha-1,3 Man(alpha-1,2 Manalpha-1,2 Man)(n) (n= 1 or2), которые обычно называют антителами к пекарским дрожжам - anti-Saccharomycescerevisiaeантитела (ASCA), являются маркерами болезни Крона. Маннан S. cerevisiae, в составе которого присутствуют эти гликановые эпитопы, используется для определения ASCA, но точный иммуноген неизвестен. Структурные и генетические исследования показали, что Candidaalbicansпроизводит энзим маннозилтрансферазу, которая может синтезировать последовательности олигоманнозу S.cerevisiae при определенных условиях. Standaert-VitseA etal, (2006) доказали, что C. albicansявляется одним из нескольких иммуногеннов для ASCA и, возможно, является основной мишенью абберантного иммунного ответа при БК (Standaert-VitseA, JouaultT, VandewalleP etal., 2006).
Для выяснения связи AЛCA и ACCA как возможных биомаркеров инвазивной инфекции C. albicans, ASCA, АЛКА, ACCA были определены в 69 сыворотках, полученных от 18 пациентов с инвазивной инфекцией С.albicans, с доказанной положительной гемокультурой, 59 сывороток от БК больных и 47 сывороток от госпитализированных больных, у которых в различных органах был обнаружен обнаружены рост грибков рода Candida, и 131 сывороток здоровых контрольных лиц. Уровни ASCA, АЛКА и АССА у лиц с БК и инвазивной инфекцией С. albicansзначительно отличались от лиц с колониями рода Саndida и здоровых лиц (P< 0.0001). У лиц с инвазивной молочницей эти уровни возрастали с прогрессированием инфекции. Используя ASCA, АЛКА, АССА и специфичного Platelia Candida-теста (BioRAD), было установлен диагноз у 100% больных с инвазивной инфекцией подтверждался с кинетикой формирования антигликановых антител, зависящей от течения инфекции. Большое число сывороток имело более, чем три положительных теста. Таким образом, оказалось, что обнаружение антител к гликанам и хитину имеет могут диагностическое значение для грибковой инфекции, и что эти тесты могут использоваться как дополнение к более специфичным тестам (SendidB, DotanN, NseirS, etal., 2008.). Эти данные ставят вопрос относительно выявления с помощью ASCA, АЛКА и АССА тех пациентов с БК, у которых имеется коморбидная грибковая инфекция, участвующая в патогенезе ВЗК, но имеющаяся не у всех больных.
Антитела к фактору убиквитинирования Е4А (UBE4A), концентрации СХСL16, аполипопротеина А-IV и резистина
При скрининге сывороток больных с ВЗК на фаговых библиотеках, экспрессирующих собственные гены человека, Sakijama et al (SakiyamaT, FujitaH, TsubouchiH. 2008) идентифицировали иммунореактивный фаговый клон, кодирующий С-терминальную субъединицу UBE4A (U-box-type ubiquitin-protein ligase). После уточнения специфичности сывороточных аутоантител против анти- UBE4A у больных с БК, был создан GST-C- UBE4A белок слияния, который был использован для тестирования иммунореактивности сывороток от 39 больных БК, 28 больных ЯК и 60 здоровых контрольных лиц. Частота обнаружения анти- UBE4A IgG была значительно выше у больных с БК, чем при ЯК или у здоровых людей (46.2% против 7,1% против 3.3% соответственно р<0.0001). Уровни анти-a GST-C-terminal UBE4A IgG хорошо коррелировали с активностью болезни (р<0.0001). Важно, что высокий уровень анти-УБЕ4 ассоциировался с осложненным течением болезни, появлением стриктур и пенетраций (р= 0.0028), и пациенты, положительные по анти-УБЕ4А, более часто подвергались хирургическому лечению (р=0.0013). Хотя экспрессия УБЕ4А была низкой в цитоплазме энтероцитов и перстевидных клеток, но иммуногистохимический анализ показал, что содержание УБЕ4А значительно повышено в энтероэндокринных клетках слизистой подвздошной кишки у больных БК, но не у здоровых субъектов. Было предположено, что продукция анти-УБЕ4А аутоантител может быть результатом повышенной экспрессии УБЕ4А в воспаленной слизистой подвздошной кишки. Точное значение повышения продукции анти-УБЕ4А антител в патогенезе БК еще остается определить.
В качестве биомаркеров ВЗК также рассматриваются ряд растворимых молекул, таких как СХСL16, аполипопротеин А-IV и резистин. Эти новые сывороточные /плазменные биомаркеры ВЗК были описаны рядом немецких исследователей (LehrkeM, KonradA, SchachingerV, etal2008; BroedlUC, SchachingerV, LingenhelA, etal2007; KonradA, LehrkeM, SchachingerV, etal2007).
СХСL16 представляет собой трансмембранный белок, составляющий экстрацеллюлярный домен хемокина, сливающегося со стержнем молекулы муцина, который проникает через поверхность клетки, и функционируя как хемокин и скавенджер рецептор, может принимать участие в разных воспалительных процессах. Он становится растворимым после расщепления металлопротеиназой АDAMATS 10 и выполнения хемокиновой функций (GoughPJ, GartonKJ, WillePT, etal2004). Lehrke et al (LehrkeM, KonradA, SchachingerV, etal2008) опубликовали данные, что СХСL16 может быть потенциальным биомаркером ВЗК после обследования 239 больных с БК, 114 с ЯК и 144 здоровых лиц. Растворимая форма СХСL16 достоверно чаще выявлялась у больных БК (р<0.001) по сравнению с ЯК и здровыми лицами. Пациенты с ЯК имели относительно умеренное, но значимое повышение СХСL16 сравнительно со здоровым контролем (р<0.001). Не было найдено различия в СХСL16 при активном и неактивном поражении кишечника при БК и ЯК.
Аполипопротеин А-IV является структурным компонентом кишечника, образуемым из богатых триглицеролом частиц хиломикронов с антиоксидантными, антиатерогенными и антивоспалительными свойствами. Недавно было установлено, что А-4 подавляет DSS-вызываемый колит у мышей (VowinkelT, MoriM, KrieglsteinCF, etal2004). По этой причине, Broedl et al (BroedlUC, Schachinger V, LingenhelA, et al 2007) протестировали может ли уровень А-4 в плазме сочетаться с ВЗК и обнаружили , что содержание А-4 обратно пропорционально с активностью болезни и с уровнем СРБ у пациентов с БК, но не ЯК (р<0.005). Однако поскольку различие в уровне А-4 между активным и неактивным состояниями БК невелика, то клиническое значение этого маркера еще предстоит определить.
Резистин известен как адипоцитами секретируемый фактор или FIZZ-3. Это пептидный гормон, который ассоциирован со многими воспалительными состояниями (BokarewaM, NagaevI, DahlbergL, etal2005). Исследованиями Konrad et al (KonradA, LehrkeM, Schachinger V, e al 2007) показано, что пациенты как с БК, так и ЯК имеют значительно повышенный уровень резистина в плазме по сравнению со здоровым контролем (р<0.0001). Уровень резистина как при БК, так и ЯК значимо ассоциирован с содержанием лейкоцитов (р<0.0001), СРБ (р<0.0001) и активностью заболевания (p<0.0001).
Панель серологических маркеров для ВЗК быстро расширяется. Серологические маркеры при ВЗК представлены быстро растущим списком неинвазивных тестов. С 2007 года появилось пять новых антигликановых антител: анти-хитобиозид IgA (АССА), анти-ламинарибиозид IgG (AЛКA), анти-манобиозид IgG (АМКА) и антитела против синтезированных двух олигоманнозных эпитопов Maн-3 и Maн-4. Эти новые биомаркеры могут служить не только для дифференциации БК, ЯК и не -ВЗК заболеваний, но также для предсказаний дальнейшего течения (поражения подвздошной кишки или толстой кишки), риска ВЗК (в качестве субклинических биомаркеров) и течения болезни (риск осложений и хирургического вмешательства). Интересно, что обнаружение антигликановых антител, включая ASCA, AЛКA и АМКА ассоциируется с простым нуклеотидным полиморфизмом (SNPs) генов чувствительных к ВЗК таким, как NOD2/CARD15, NOD/CARD4, Toll-like рецепторы (TLR) 2 и 4 и бета-дефензин-1. Более того, наблюдается дозозависимое влияние гена: анти-гликановая позитивность наблюдается встречается чаще, когда число NOD2/CARD15 в SNPS увеличивается. Другие новые сывороточные/плазменные биомаркеры включают фактор убиквитинирования Е4А (UBE4A), СXCL16 (хемокин), аполипопротеин А-IV и резистин.
Хотя в иммунологической диагностике ВЗК ASCA и пАНЦА продолжают использоваться наиболее широко, но появляются все новые антитела, направленные на различные антимикробные агенты, как ,например, анти-Омр С, antiPseudomonasfluorescens (анти-I2) и анти-CBir1. Последний является первым бактериальным антигеном, вызывающим колит у животных и который может приводить к патогенному иммунному ответу у ВЗК больных (антифлагеллиновые антитела). Среди ранее изученных бактериальных биомаркеров следует назвать антитела против белка порина С наружной мембраны митохондрий (анти-ОмрС), Pseudomonas fluorescens bacterial sequence 12 (анти-12, который является гомологом фактора транскрипции бактерий (SandbornWJ. 2004, Peyrin-BirouletL, Standaert-VitseA, BrancheJ, ChamaillardM. 2007; PappM, NormanGL, AltorjayI, LakatosPL. 2007; PappM, AltorjayI, DotanN, etal2008; JoossensS, ColombelJF, LandersCetal2006 ). Было установлено, что пациенты с БК, которые оказались позитивными по многим анти-микробным антителам (ASCA, анти-OmpC, анти-Cbir и анти-I2), имеют повышенный риск осложненного течения заболевания. Пациенты, которые оказались позитивны по всем четырем биомаркерам имели 11-кратное повышение риска развития пенетрации кишечника или образования стриктур (DubinskyMC, LinYC, DutridgeD, etal2006; MowWS, VasiliauskasEA, LinYC, etal2004; PapadakisKA, YangH, IppolitiA, etal 2007; SpivakJ, LandersCJ, VasiliauskasEA, etal2006; PappM, AltorjayI, NormanGL, etal2007). Больные БК, позитивные по трем маркерам (анти-OmpC, анти-Cbir и анти-I2) более часто подвергались оперативному вмешательству по сравнению с негативными по биомаркерам больными (72% против 23%). В то же время, не было найдено связи серотипа с фенотипом заболевания ЯК (PappM, AltorjayI, NormanGL, etal2007). Повышенный уровень серологических биомаркеров ассоциируется с особенностями генетики ВЗК. Члены семьей пациентов с БК, имеющие аллельный вариант NOD2/CARD15 3020insC, имеют повышенную интестинальную проницаемость, что сочеталось с повышенным уровнем серологических биомаркеов (PappM, AltorjayI, NormanGL, etal2007; BuhnerS, BuningC, GenschelJ, etal2006; HarrerM, ReinischW, DejacoC, etal2003). Однако не все исследователи смогли подтвердить эту связь (ArnottID, LandersCJ, NimmoEJ, etal2004; AbreuMT, TaylorKD, LinYC, etal2002; DevlinSM, YangH, IppolitiA, etal2007; DassopoulosT, NguyenGC, BittonA, etal. 2007). По крайней мере, два десятка растворимых свыороточных молекул рассматриваются как биомаркеры при ВЗК. Они включают СРБ, кальпротектин, PMN-эластазу, растворимые селектины, молекулы адгезии и прокальцитонин (DesaiD, FaubionWA, SandbornWJ. 2007; LanghorstJ, ElsenbruchS, KoelzerJ, etal 2008; MagroF, AraujoF, PereiraP, etal2004; HerrlingerK, StangeEF.2000; HerrlingerKR, DittmannR, WeitzG, etal2004). Однако большинство из них повышены при других воспалительных или патологических состояниях и поэтому отличаются недостаточной специфичностью для ВЗК. Роль различных антител в текущем диагностическом алгоритме ВЗК еще неустановлена в виду их ограниченной чувствительности. Поэтому связь серологических маркеров с течением болезни и фенотипом оказывается все чаще в фокусе интересов ревматологов и иммунологов. Все большее число наблюдений подтверждает, что у больных БК экспрессия многих серологических маркеров в высоком титре позволяет предсказать осложненное течение болезни (появление стриктур/перфораций) и высокий риск хирургического вмешательства по сравнению с лицами с низким титром антител. Несмотря на невысокую встречаемость многих серологических маркеров, выделение серопозитивных клинических подгрупп среди больных ВЗК будет способствовать более стандартизованному терапевтическому подходу и позволит лучше понять патомеханизм ВЗК. Дальнейшие проспективные клинические исследования необходимы для установления клинической роли серологических тестов при ВЗК (PappM, AltorjayI, LakatosPL. 2007).
Ни один из существующих коммерчески доступных серологических тестов/анализов, не может быть использован как единственное средство диагностики ВЗК в клинике, но может быть рекомендован как дополнение к эндоскопии для подтвержения диагноза и прогноза заболевания (VermeireS, VanAsscheG, RutgeertsP 2006; KornbluthA, SacharDB. 2004). Учитывая, что эндоскопия является высокозатратным методом диагностики (включая инвазивный характер, трудоемкость и высокую цену колоноскопической процедуры) нужны новые маркеры и разработка более всеобъемлющих биоинформационных алгоритмов со множественными биомаркерами.
Новые технологии продемонстировали значительный потенциал для идентификации ранее неизвестных биомаркеров. Можно предсказать,что дальнейшее развитие лабораторной медицины приведет к ингерации многих биомаркеров для биоинформационного анализа/моделирования. В результате будут разработаны специфичные серологические наборы биомаркеров, которые будут содержать биомаркеры, специфичные для следующих функцией: 1) дифференциальной диагностики БК и ЯК и от других воспалительных поражений кишечника, но имеющих сходные клинические проявления (такие как абдоминальные боли и диаррея при инфекционном колите или синдроме раздраженного кишечника); 2) предсказывать риск ВЗК (до начала болезни, субклинические биомаркеры) и течение заболевания (риск осложнений и хирургических вмешательств; 3) предсказывать терапевтическую эффективность даже перед началом специфической лекарственной терапии 4) мониторировать терапевтическую эффективность и предсказывать рецидивы. Такие наборы серологических показателей могут быть уточнены на основе лучшего понимания серологических реакций для повышения точности диагноза и /или прогноза при ВЗК( LiX., ConklinL., AlexP, 2008).Генетические маркеры такие как CARD15/NOD2 могут быть полезны в будущем, когда в комбинации с другими маркерами смогут предсказывать течение болезни, и функциональная геномика и протеомика могут быть использованы для быстрого скрининга больных ВЗК с субклиническими характеристиками (BeavenSW, AbreuMT. 2004).
Таким образом, при высокой специфичности применительно к ВЗК, отмечается низкая чувствительность многих серологических маркеров. С другой стороны, антитела в качестве биомаркеров позволяют обеспечить наиболее высокую специфичность, что отличает их диагностическое использование от других биохимических маркеров. Трудности их клинического применения в настоящее время состоят в отсутствии полной ясности в механизмах патогенеза заболевания, и, значит, условий формирования тех или иных аутоантител. Как следствие, выявление антител имеет значение для понимания избирательности в отношении чувствительности и для выделения подгрупп лиц с особым фенотипом и возможно исходом и прогнозом. Это положение применимо, разумеется, только к малочувствительным, но высокоспецифичным биомаркерам. В большинстве работ нет анализа клинических данных тех подгрупп лиц, у которых тест оказался положительным и чувствительным, и подгрупп лиц, у которых он оказался отрицательным.