Определение антител к антигенам Borrelia spp.

Клещевой боррелиоз (болезнь Лайма) у человека вызывается бактериями Borrelia burgdorferi sensu lato, относящимися к спирохетам. Возбудитель попадает в организм человека при укусе клеща, инфицированного B. burgdorferi. Переносчиками боррелиоза являются иксодовые клещи, повсеместно распространённые в умеренном поясе северного полушария. Инфицированность клещей боррелиями по разным данным составляет 20-40%. Чаще всего заражение людей происходит в период активности клещей – весной и летом.

Инкубационный период заболевания после инфицирования составляет, в среднем, 1-2 недели (от 3 до 32 дней). На ранних стадиях могут наблюдаться такие симптомы, как усталость, озноб, головные боли.

В течении болезни Лайма выделяют три стадии: раннюю локальную, раннюю диссеминированную и позднюю.

1) Ранняя локальная стадия. В месте проникновения возбудителя у 50–80% больных отмечается кожное воспаление - мигрирующая эритема. Это кольцевидное покраснение кожи, которое постепенно расширяется, его диаметр как правило превышает 5 см, держится около месяца. Иногда это единственное проявление ранней стадии. Согласно современным рекомендациям, при наличии укуса клеща в анамнезе и типичной эритемы, антибактериальная терапия может быть начата даже без серологического исследования.

Рис 1. Мигрирующая эритема [2]

В 20–50% случаев заболевания эритема отсутствует в начале заболевания (безэритемная форма), и сразу развивается диссеминированная стадия заболевания.

2) Ранняя диссеминированная стадия. Диссеминация происходит, если заболевание не диагностировано и/или не проведена антибактериальная терапия. У 10-15% пациентов при диссеминации развиваются признаки поражения нервной системы (менингит, менинго-полирадикулоневрит, периферический паралич лицевого нерва и др.), у 4-10% – поражение сердечно-сосудистой системы (Лайм-кардит, проявляющийся в виде миокардита, перикардита, нарушений ритма, атрио-вентрикулярной блокады). Наиболее частым и наиболее отсроченным проявлением у нелеченных больных является Лайм-артрит, он развивается у 60% пациентов, спустя месяцы после заражения (в среднем, через 6 месяцев, но может появляться и спустя год, два года). Поражается один или несколько крупных суставов, чаще всего – коленный сустав. Могут быть мышечные проявления: миалгия, мышечная слабость, миозит. Таким пациенты испытывают затруднение с поднятием рук выше головы, ходьбой по лестнице, подъёмом тяжестей. Очень редко может развиваться дисфагия или поражение дыхательных мышц.

3) Поздняя стадия. В ряде случаев, особенно при поздно начатом лечении, заболевание переходит в третью – хроническую – стадию, для которой характерен хронический атрофический акродерматит и поздний энцефаломиелит. Следует отметить, что у определенной части больных не наступает полное выздоровление в течение длительного времени после острого периода, может до двух лет сохраняться субфебрилитет, длительно – артриты, прогрессирующий энцефаломиелит, энцефалопатия, патологические изменения со стороны сердечно-сосудистой системы.

Рис 2 - хронический атрофический акродерматит [2]

Иммуноблот антител к антигенам боррелий выявляет антитела классов IgG и IgM, обладает высокой специфичностью (98 %) и чувствительностью (95 %) и является более точным по сравнению с ИФА.

В качестве антигенов используются очищенные структурные белки боррелий, а также полученные рекомбинантным путем фактор патогеннности VIsE трех основных видов боррелий:  B. Afzelii, B.burgdorferi  sensu stricto, B.garinii. Все антигены делятся на поверхностные (OspC, VIsE) и структурные (флагеллин p41 и др). Поверхностные белки выступают в роли рецепторов и определение антител к данным белкам является принципиальным для диагностики, поскольку они представляют уникальные для боррелий факторы патогенности. Флагеллиновые белки могут перекрестно реагировать с антителами других бактерий, клетками и тканями человека и не являются специфическими.

В тест-систему входит полный перечень основных мембранных антигенов к трем видам боррелий, что обеспечивает её высокую чувствительность и специфичность:

• IgG - OspC B.Afzelii, B.burgdorferi sensu stricto, B.garinii вместе, VIsE отдельно к трем видам боррелий

• IgМ - OspC B. Afzelii, B.burgdorferi sensu stricto, B.garinii, VIsE B.burgdorferi sensu stricto.

• Также в иммуноблот входит широкий спектр рекомбинантных белков (р83, р21,р20, р41, р58, р39, р19, р18) и растворимых мембранных (Lipid B.Afzelii и  B.burgdorferi sensu stricto).

Интерпретация результатов:

Клиническая интерпретация зависит от мишеней выявленных антител. Антитела к поверхностным антигенам являются маркерами острой недавней инфекции, а антитела к структурным компонентам бактерии ­– длительно-текущей инфекции и являются характерными для хронических форм боррелиоза.

Ранние маркеры:

• IgM к OspC (р25) – наиболее ранний видоспецифичный маркер (стадия 1); 

• IgM к флагеллину (р41), BmpA (р39) – преимущественно ранние маркеры (стадия 1), но антитела сохраняются при диссеминации (стадия 2);

• IgG к VisE – ранний высокоспецифичный и видоспецифичный маркер;

• IgG к OspC (р25) – преимущественно ранний маркер (выявляются в конце 1-й стадии заболевания и сохраняются на протяжении 2-й стадии; на 3-й стадии данные АТ встречаются крайне редко);

Поздние маркеры:

• IgG к флагеллину (р41) встречаются на хронических стадиях болезни (стадия 2 и 3);

• IgG к белку BmpA (р39) встречаются на хронических стадиях болезни (стадия 2 и 3);

• IgG к белку р58, р21, p20, p19, p18 встречаются на хронических стадиях болезни (стадия 2 и 3);

• IgG липид Lipid Ba — поздние стадии инфицирования, вероятен хронический боррелиоз; 

• IgG к липиду Lipid Bb — поздние стадии инфицирования, вероятен хронический боррелиоз;

• IgG к р83 встречаются на поздних этапах (3 стадия), нейроборрелиоз;

Результат окрашивания денситометрируется с помощью специального ПО, и выдается полуколичественно в «+», зависит от интенсивности окрашивания бенда (чем больше антител, тем более яркая окраска). Интерпретацию результата лучше проводить совместно для IgG и IgM. 

Рекомендуем для клиницистов следующую трактовку: