Определение антител к антигенам Borrelia spp.

Клещевой боррелиоз (болезнь Лайма) у человека вызывается бактериями Borrelia burgdorferi sensu lato, относящимися к спирохетам. Возбудитель попадает в организм человека при укусе клеща, инфицированного B. burgdorferi. Переносчиками боррелиоза являются иксодовые клещи, повсеместно распространённые в умеренном поясе Северного полушария. Инфицированность клещей боррелиями по разным данным составляет 20-40%. Чаще всего заражение людей происходит в период активности клещей – весной и летом.

Инкубационный период заболевания после инфицирования составляет, в среднем, 1-2 недели (от 3 до 32 дней). На ранних стадиях могут наблюдаться такие симптомы, как усталость, озноб, головные боли.

В течении болезни Лайма выделяют три стадии: раннюю локальную, раннюю диссеминированную и позднюю.

1) Ранняя локальная стадия. В месте проникновения возбудителя у 50–80% больных отмечается кожное воспаление - мигрирующая эритема. Это кольцевидное покраснение кожи, которое постепенно расширяется, его диаметр как правило превышает 5 см, держится около месяца. Иногда это единственное проявление ранней стадии. Согласно современным рекомендациям, при наличии укуса клеща в анамнезе и типичной эритемы, антибактериальная терапия может быть начата даже без серологического исследования.

Рис 1. Мигрирующая эритема [2]

В 20–50% случаев заболевания эритема отсутствует в начале заболевания (безэритемная форма), и сразу развивается диссеминированная стадия заболевания.

2) Ранняя диссеминированная стадия. Диссеминация происходит, если заболевание не диагностировано и/или не проведена антибактериальная терапия. У 10-15% пациентов при диссеминации развиваются признаки поражения нервной системы (менингит, менинго-полирадикулоневрит, периферический паралич лицевого нерва, нейробореллиоз), у 4-10% – поражение сердечно-сосудистой системы (Лайм-кардит, проявляющийся в виде миокардита, перикардита, нарушений ритма, атрио-вентрикулярной блокады). Наиболее частым и наиболее отсроченным проявлением у нелеченных больных является Лайм-артрит, он развивается у 60% пациентов, спустя месяцы после заражения (в среднем, через 6 месяцев, но может появляться и спустя год, два года). Поражается один или несколько крупных суставов, чаще всего – коленный сустав. Могут быть мышечные проявления: миалгия, мышечная слабость, миозит. Таким пациенты испытывают затруднение с поднятием рук выше головы, ходьбой по лестнице, подъёмом тяжестей. Очень редко может развиваться дисфагия или поражение дыхательных мышц.

3) Поздняя стадия. В ряде случаев, особенно при поздно начатом лечении, заболевание переходит в третью – хроническую – стадию, для которой характерен хронический атрофический акродерматит и поздний энцефаломиелит. Следует отметить, что у определенной части больных не наступает полное выздоровление в течение длительного времени после острого периода, может до двух лет сохраняться субфебрилитет, длительно – артриты, прогрессирующий энцефаломиелит, энцефалопатия, патологические изменения со стороны сердечно-сосудистой системы.

Рис 2 - хронический атрофический акродерматит [2]

Диагностика болезни Лайма основывается на серологических (ИФА, иммуноблот) и молекулярно-генетических (ПЦР) методах анализа. Совершенствование серологических методов для диагностики боррелиоза позволило в последнее время перейти к двухшаговому подтверждению диагноза: первый этап - ИФА, второй - иммуноблоттинг.

Иммуноглобулины M (IgM) появляются  в крови довольна рано после инфицирования, однако выявить их удается обычно только через 2-3 недели. Примерно через 6 недель концентрация IgM достигает максимума и затем постепенно уменьшается (в течение нескольких месяцев и даже лет). Исследование IgM оптимально проводить для диагностики недавнего заражения (в течение 1-2 месяцев после первых симптомов). Антитела IgМ к Borrelia, сформированные в ранней фазе боррелиозной инфекции, обычно направлены против антигена OspC (p25) (наружный поверхностный белок С, маркер свежей инфекции). Обнаружение IgM-антител против других специфичных антигенов боррелий при отсутствии антител к OspC не считается достаточным указанием на недавно возникшую инфекцию.

Для установления диагноза свежей боррелиозной инфекции полученный положительный результат по антителам класса IgM должен быть обязательно подтвержден через 3-6 недель положительным результатом по антителам класса IgG на свежем образце крови.

Иммунитет к Borrelia burgdorferi носит нестерильный характер. У переболевших людей возможно повторное заражение через несколько лет. Отрицательный результат по IgM-антителам не исключает наличия свежей инфекции, поскольку при повторном заражении могут формироваться только антитела класса IgG.

Иммуноглобулины G (IgG) можно выявить через несколько недель после инфицирования, а максимального уровня они достигают через 4-6 месяцев и циркулируют в крови длительный срок (от нескольких месяцев до нескольких лет) даже после успешной антимикробной терапии и излечения болезни. Поэтому по наличию и титру антител об успехе лечения судить нельзя. На диссеминированной и хронической стадиях специфические антитела к возбудителю класса IgG присутствуют практически всегда.

Если предполагается неврологическая манифестация заболевания, важным диагностическим критерием является обнаружение интратекально продуцируемых антител в образцах спинномозговой жидкости.

Иммуноблот антител к антигенам боррелий выявляет антитела классов IgG и IgM. Исследование обладает высокой специфичностью (98 %) и чувствительностью (95 %), является более точным по сравнению с традиционным методом ИФА. Иммуноблоттинг позволяет раздельно определять IgM и IgG к отдельным белкам боррелий.

В качестве АГ в основном используются рекомбинантные белки p83-100, p58, p41i, p39 (BmpA), OspC (p20-25), p17 (DbpA), BBK32, VlsE, специфичные для трех видов боррелий. Важно, что иммуноблот позволяет выявлять сенсибилизацию к поверхностным белкам возбудителя, которые характерны для острой инфекции, а также антитела к структурным белкам боррелий, которые характерны только для длительно-текущей инфекции и являются характерными для хронических форм боррелиоза.

Критерии положительного иммуноблота:

1) Для IgM должны быть положительны два из трёх бэндов: OspC (24 kDa), BmpA (39 kDa), Fla (41 kDa)

2) Для IgG должны быть положительны пять из десяти бэндов: OspC (18, 21 kDa), BmpA (28, 30, 39 kDa), Fla (41, 45, 58, 66, 93 kDa)

Литература:

1. Branda JA, Steere AC. Laboratory Diagnosis of Lyme Borreliosis. Clin Microbiol Rev. 2021 Jan 27;34(2):e00018-19. doi: 10.1128/CMR.00018-19
2. Trevisan G, Bonin S, Ruscio M. A Practical Approach to the Diagnosis of Lyme Borreliosis: From Clinical Heterogeneity to Laboratory Methods. Front Med (Lausanne). 2020 Jul 23;7:265. doi: 10.3389/fmed.2020.00265
3. Dessau RB, van Dam AP, Fingerle V, Gray J, Hovius JW, Hunfeld KP, Jaulhac B, Kahl O, Kristoferitsch W, Lindgren PE, Markowicz M, Mavin S, Ornstein K, Rupprecht T, Stanek G, Strle F. To test or not to test? Laboratory support for the diagnosis of Lyme borreliosis: a position paper of ESGBOR, the ESCMID study group for Lyme borreliosis. Clin Microbiol Infect. 2018 Feb;24(2):118-124. doi: 10.1016/j.cmi.2017.08.025
4. John TM, Taege AJ. Appropriate laboratory testing in Lyme disease. Cleve Clin J Med. 2019 Nov;86(11):751-759. doi: 10.3949/ccjm.86a.19029