Молекулярно-генетическая диагностика 1, 2А, 2В, 2М, 2N, 3 типов болезни фон Виллебранда (18-21 и 28 экзоны гена VWF)

Фактор фон Виллебранда (VWF) – ключевой компонент свертывающей системы крови. При повреждении сосудов VWF связывается с тромбоцитами, вызывая их адгезию, агрегацию и формирование тромба. Также VWF переносит в крови фактор свертывания VIII, защищая его от инактивации. Нарушение этих функций при дефиците VWF ведет к снижению свертываемости крови и склонности к кровотечениям.

Болезнь фон Виллибранда (БФВ) представляет собой одно из самых распространенных заболеваний, связанных с повышенным риском кровотечений. Чаще всего это состояние проявляется эпизодами кровоизлияний на слизистых и коже при физическом воздействии, также может наблюдаться меноррагия, тромбоцитопения, кровоизлияния в ткани мышц и суставы. В зависимости от формы патологического изменения VWF различают варианты болезни с количественным изменением (тип 1 и тип 3) и с качественными изменениями (тип 2А, 2В, 2М, 2N). 

Тип 1 БФВ представляет собой наиболее распространенную форму БФВ и связан со снижением концентрации VWF. Наследуется аутосомно-доминантно, однако примерно у 25% пациентов не удается найти патогенных изменений в гене VWF. 

При типе 3 БФВ наблюдается практически полное отсутствие VWF, что приводит к тяжелым кровотечениям, наследуется аутосомно-рецессивно. 

При типах 2А, 2В, 2М БФВ наблюдается нарушение функциональной активности VWF. Данные типы БФВ наследуются аутосомно-доминантно.  

При 2N типе заболевания не наблюдается снижение концентрации VWF, однако нарушается его связывание с фактором VIII, что приводит к повышенной скорости деградации последнего. В связи с описанным патогенезом, симптомы 2N типа БФВ схожи с проявлениями гемофилии А. Тип 2N наследуется аутосомно-рецессивно. 

Для диагностики БВФ используется комплекс коагулогических и молекулярно-генетических тестов.

На первом этапе рекомендуется проведение коагулологического скрининга, включающего общий анализ крови с подсчетом количества тромбоцитов; определение АЧТВ, ПВ, ТВ и фибриногена.

На втором этапе рекомендуется проведение специальных коагулологических исследований, таких как антиген фактора Виллебранда (vWF:Ag), прокоагулянтная активность фактора FVIII (FVIII:C), ристоцетин кофакторная активности фактора Виллебранда (vWF:RCo), коллагенсвязывающая активность фактора Виллебранда (vWF:CB), расчет соотношения коллагенсвязывающей активности фактора Виллебранда и антигена фактора Виллебранда (vWF:CB/ vWF:Ag), расчет соотношения ристоцетин кофакторной активности фактора Виллебранда и антигена фактора Виллебранда (vWF:RСo/vWF:Ag), агрегация тромбоцитов, индуцированная ристоцетином, в двух концентрациях (RIPA), фактор VIII-связывающей активности фактора Виллебранда (vWF:FVIIIB).

Тест 01.02.15.1535 Исследование уровня антигена фактора Виллебранда

Тест 01.02.15.1540 Исследование активности и свойств фактора Виллебранда в крови

Для подтверждения диагноза у пациента, кровных родственников и с целью пренатальной диагностики рекомендуется исследование аберраций в гене VWF. Анализ аберраций позволяет не только верифицировать диагноз БВ, но и способствует уточнению типа заболевания, поскольку генные дефекты, соответствующие различным типам и подтипам БВ, различаются по своему характеру и локализации.

Ген VWF локализован в прителомерной области короткого плеча 12-й хромосомы. Патогенные варианты, соответствующие типу 2N БВ, локализованы в экзонах 17–21, 24, 25, 27. Патогенные варианты типа 2A находятся в экзонах 12, 14–16, 26, 28, 51, 52; типа 2M – 17, 27, 28, 30, 31, 52; типа 2B бывают только в экзоне 28. Патогенные варианты, определяющие типы 1 и 3 БВ, разбросаны по всему гену. Для выявления наиболее частых аберраций обычно производится анализ 18-21 и 28 экзона гена VWF.

Для БВ 1-го и 3-го типов характерны «тяжелые» патогенные варианты (нонсенс-мутации, мутации со сдвигом рамки считывания, мутации в канонических динуклеотидах сайтов сплайсинга) и рассеянные по всему пространству гена, тогда как при 2-м типе (кроме рецессивных вариантов 2A и 2N) встречаются только приводящие к аминокислотным заменам миссенс-мутации, причем преимущественно в самом большом экзоне 28 гена vWF, кодирующем домены А1 и А2, отвечающие за мультимеризацию белка. 

Молекулярно-генетический анализ особенно важен в случае типа 2N БВ, который иногда ошибочно диагностируется как легкая форма гемофилии А (и наоборот).

Варианты БВ 3-го типа и подтипа 2N наследуются рецессивно, и, следовательно, для их проявления необходимо наличие патогенных вариантов в обоих аллелях гена vWF. Для подтипов 2В и 2М характерно доминантное наследование, то есть достаточно нарушения только в одном из аллелей. Тип 1 и подтип 2A в генетическом плане более сложны и могут иметь оба варианта наследования

Обнаружение патогенного или условно патогенного вариант гена VWF, ассоциированного с болезнью фон Виллибранда при наличии характерных клинических и лабораторных данных позволяет подтвердить наследственную форму БВ.