Антитела к комплексу лактоферрин-ДНК на нейтрофилах для определения атипичных АНЦА (xАНЦА) методом непрямой иммунофлюоресценции

Антитела к цитоплазме нейтрофилов (АНЦА) представляют собой группу аутоантител, направленных против антигенов, локализованных в азурофильных и специфических гранулах нейтрофилов. Выделяют два основных типа свечения – цитоплазматический (цАНЦА), характерный для гранулематоза Вегенера, и перинуклеарный (пАНЦА), характерный для других микроскопических васкулитов. Может также выявляться атипичный характер свечения АНЦА (аАНЦА/xАНЦА/ атипичный перинуклеарный АНЦА), который отмечается при воспалительных заболеваниях кишечника (ВЗК), а также при аутоиммунных заболеваниях печени, ревматоидном артрите, системной красной волчанке, синдроме Шегрена и системной склеродермии, а также лекарственно-индуцированных васкулитах (гидралазин, левамизол-содержащий кокаин, миноциклин, аллопуринол, сульфасалазин, D-пеницилламин и препараты золота). Для хАНЦА характерно диффузное цитоплазматическое окрашивание с перинуклеарным усилением.

В отличие от цАНЦА и пАНЦА, для которых классическими антигенными мишенями являются протеиназа 3 (ПР3) и миелопероксидаза (МПО) соответственно, для хАНЦА выявлены другие антигенными мишени, среди которых выделяют эластазу, катепсин G, лактоферрин, лизоцим, «бактерицидный, увеличивающий проницаемость белок (BPI)» и азурозидин. Многие авторы называют основной мишенью АНЦА при ВЗК комплексы ДНК-лактоферрин, которые формируются при деградации ядра под действием этанола.

Впервые хАНЦА класса IgG у пациентов с язвенным колитом (ЯК) были обнаружены в 1990 г. двумя независимыми друг от друга группами исследователей из Калифорнийского и Фрайбургского университетов, которые сообщили о встречаемости аутоантител в 84% и 59% случаев соответственно. У больных болезнью Крона (БК) позитивные титры хАНЦА составляют 10–20%. хАНЦА выявляется у пациентов c аутоиммунным гепатитом (50%), первичным склерозирующим холангитом (ПСХ) (40%), первичным билиарным холангитом (5%), ревматоидным артритом (5–10%). Среди пациентов с ВЗК в сочетании с ПСХ частота встречаемости хАНЦА достигает 50–85%.

Серопозитивность по xАНЦА ассоциирована с клиническими параметрами ВЗК. Показано, что положительные по xАНЦА пациенты с ВЗК имели более молодой возраст на момент установления диагноза (29,2 ± 11,8 года) по сравнению с серонегативными пациентами (43,5 ± 15,3 года). Оказалось, что серопозитивные по xАНЦА пациенты с ЯК имели высокую вероятность левостороннего поражения кишечника, а также тяжелого, прогрессирующего и часто рецидивирующего течения заболевания. Пациенты с диагностическим титром xАНЦА имели большую длительность заболевания, большую частоту стула и гипертермии. Кроме того, у них чаще встречался тромбоцитоз, лейкоцитоз и гипоальбуминемия.

Интересны результаты исследований относительно ассоциации xАНЦА с прогнозированием ответа на терапию ВЗК. Серопозитивные по xАНЦА пациенты имели высокий риск развития левостороннего, рефрактерного к сульфаниламидной и гормональной терапии ЯК, служащего показанием к проведению хирургического лечения. Отрицательный статус xАНЦА у пациентов с ЯК был независимым предиктором раннего клинического ответа на инфликсимаб, однако не влиял на достижение ремиссии заболевания. Вместе с тем, в отличие от АНЦА-ассоциированных васкулитов, титры аутоантител при ЯК были стабильны на всем протяжении заболевания и не зависели от эффективности медикаментозного и хирургического лечения, что не позволяет использовать АНЦА для мониторинга и прогнозирования воспалительной активности заболевания.

В соответствии с международными рекомендациями 2020 г., тестирование на xАНЦА и ASCA может использоваться для дифференциальной диагностики ЯК и БК в сложных диагностических случаях.

Антитела к комплексу ДНК-лактоферрин. Лактоферрин – железосвязывающий белок, локализованный в цитоплазматических гранулах полиморфноядерных нейтрофилов, который оказывает выраженное бактериостатическое действие, обладает способностью предотвращать активацию комплемента и образование гидроксил-радикалов, а также служит неспецифическим противовоспалительным фактором защиты слизистых оболочек, в том числе кишечника. Молекулы лактоферрина, связанные с ДНК, характеризуются высокой конформационной устойчивостью, что при идентификации антигенных мишеней хАНЦА обусловливает высокую специфичность определения аутоантител к ДНК-лактоферриновым комплексам. Частота обнаружения аутоантител к ДНК-лактоферриновым комплексам у пациентов с язвенным колитом (ЯК) составляет 72%, болезнью Крона – 6,3%, первичным склерозирующим холангитом (ПСХ) – 22% и здоровых людей – 2%. Обнаружение антител к ДНК-лактоферриновым комплексам служит наиболее информативным маркером в диагностике ЯК. Кроме того, у половины пациентов с ПСХ обнаружение антител к ДНК-лактоферриновым комплексам в 100% случаев ассоциировано с ЯК, что позволяет использовать определение данных аутоантител в качестве диагностического и прогностического биомаркера ЯК с внекишечными проявлениями.