Лабораторная диагностика ревматических заболеваний (вебинар). Лапин С.В.

Введение: интерфероновый «автограф» (ИА) — повышение экспрессии ряда интерферон-индуцируемых генов, считается отличительной чертой некоторых аутоиммунных заболеваний, в том числе системной красной волчанки (СКВ). Знание клинических особенностей СКВ, ассоциирующихся с повышенным ИА, имеет потенциал для оценки стратегии ведения и прогноза при формировании стероидорезистентных и «трудных для лечения» форм. Вместе с тем изучены указанные особенности мало.

Цель исследования: изучить клинико-лабораторные особенности течения СКВ и оценить риск стероидорезистентности (СР) у больных с повышенной экспрессией генов ИА.

Материал и методы: изучены данные 19 женщин с СКВ в возрасте 18–45 лет. Выполнено определение уровня экспрессии генов интерферонов (ИФН) I типа (IFI27, IFI44L, IFIT1, ISG15, SIGLEC1, ACTB) методом ПЦР в реальном времени с расчетом суммарной экспрессии — ИА. Оценены клинико-лабораторные проявления СКВ у лиц с нормальным и повышенным ИА, а также риск СР, рассчитанный по оригинальной методике с помощью разработанного алгоритма и компьютерной программы.

Результаты исследования: у пациентов с серозитами чаще отмечено повышение экспрессии генов IFIT1 (3 из 4 с серозитами против 3 из 15 без серозитов, p=0,05) и IFI44L (3 из 4 с серозитами против 2 из 15 без серозитов, p=0,04). У пациентов с антифосфолипидным синдромом (АФС) чаще выявлена повышенная экспрессия генов IFIT1 (4 из 5 с АФС против 3 из 14 без АФС, p=0,05) и SIGLEC1 (5 из 5 с АФС против 5 из 14 без АФС, p=0,02). Пациенты с высоким ИА имели более высокий титр антинуклеарного фактора (АНФ) в дебюте заболевания (Ме [Q1; Q3] 1:1440 [1:280; 1:7040] против 1:640 [1:320; 1:960], p=0,02), больший уровень сывороточной мочевой кислоты (МК) (407,3±147,9 мкмоль/л против 346,2±86,5 мкмоль/л, p=0,04) и общего холестерина (5,74±1,2 ммоль/л против 4,35±0,9 ммоль/л, p=0,05), чем пациенты с нормальным ИА. Пациенты с высоким ИА чаще имели риск развития СР (4 из 8 против 1 из 11 пациентов соответственно, p=0,05).

Заключение: пациенты с высоким ИА чаще, чем пациенты с нормальным ИА, имеют более высокую иммунологическую активность в дебюте, более высокие уровни МК и холестерина. Повышенная экспрессия отдельных генов ИА чаще встречалась у пациентов с ювенильным дебютом, серозитами и АФС, чем у пациентов без серозитов и АФС.

Процитировать:

Мусийчук М.М., Алиев Д.Б., Лапин С.В., Назаров В.Д., Девяткина Е.А., Инамова О.В., Гайдукова И.З. Клинико-иммунологические особенности системной красной волчанки у пациентов с повышенной экспрессией генов интерферонового «автографа». РМЖ. Медицинское обозрение. 2026;10(3):160-167. DOI: 10.32364/2587-6821-2026-10-3-8.

Актуальность. Системная красная волчанка (СКВ) – аутоиммунное заболевание, характеризующееся нарушением иммунной толерантности и устойчивой выработкой аутоантител.

Цель исследования – изучение субпопуляционного состава цитотоксических CD8⁺ Т-лимфоцитов (Тцит) и определение клинического значения выявленных при системной красной волчанке изменений. Материалы и методы. В исследование включено 35 пациентов с СКВ; 33 здоровых человека составили группу контроля. Для выявления субпопуляций Т-клеток периферической крови использовался метод проточной цитометрии. Т-лимфоциты определяли с использованием антител против СD3⁺, CD4⁺, CD8⁺. Для определения субпопуляций Тцит применяли антитела против CD45RA и CD62L. На основании комбинации экспрессии рецепторов CCR4, CCR6, CXCR3 и CXCR5 обнаружены основные субпопуляции Тцит: цитотоксические клетки 1-го типа (Tc1), 2-го типа (Тс2), 17-го типа (Tc17), 17-го и 1-го типов (Тс17.1), 17/22-го типа (Tc17.22), Т-фолликулярные цитотоксические лимфоциты (Тfc).

Результаты. Абсолютные и относительные значения числа Тцит, наивных Тцит, а также Тцит центральной и эффекторной памяти в группе пациентов с СКВ были статистически значимо выше, чем в контрольной группе. Кроме того, в группе пациентов с СКВ выявлено статистически значимое снижение относительного содержания Тс1, Тс17.1 и Tfc1 и статистически значимое повышение относительного содержания Тс2, Тfc17 и Тfc17.1 по сравнению с группой контроля. Была обнаружена статистически значимая положительная связь количества Тс1 (r=0,404, p<0,05; r=0,526, p<0,05), а также статистически значимая отрицательная связь Тс2 (r=–0,378, p<0,05; r=–0,548, p<0,05) с уровнем С3 и С4 компонентов комплемента. Выявлена связь числа Tfc17 и Тfc17.1 c уровнем IgG (r=–0,42, p<0,05; r=–0,553, p<0,05), а Тfc1 – с уровнем антител к двуспиральной ДНК (r=–0,361; p<0,05), а Тfc1 – с уровнем антител к двуспиральной ДНК (r=–0,361; p<0,05).

Выводы. Относительные и абсолютные значения численности субпопуляций Tцит периферической крови у пациентов с СКВ изменены по сравнению с группой контроля. Повышение содержания Tc2 при СКВ связано с маркерами активности заболевания. Эти результаты демонстрируют важную роль Tc2 патогенезе СКВ. В то же время субпопуляции Tc1, Tc17, Tc17.1 и Tfc, вероятно, выполняют регуляторные функции.

Процитировать:

Беневоленская С.С., Кудрявцев И.В., Серебрякова М.К., Рубинштейн А.А., Кувардин Е.С., Григорьева И.Н., Алиев Д.Б., Заммоева Д.Б., Моторин Д.В., Головкин А.С., Калинина О.В., Лапин С.В., Гайдукова И.З., Маслянский А.Л., Гайдукова Е.К. Основные субпопуляции CD8⁺ Т-клеток периферической крови у пациентов с системной красной волчанкой. Научно-практическая ревматология. 2024;62(1):90-97. https://doi.org/10.47360/1995-4484-2024-90-97

Тромбофилия, так же как и множественная органная дисфункция, ‒ характерное проявление новой коронавирусной инфекции, протекающей в тяжелой форме, которое очень напоминает клиническую картину катастрофического антифосфолипидного синдрома (кАФС).

Цель: оценить, является ли кАФС обязательным проявлением тяжелых форм COVID-19.

Материал и методы: 45 пациентов с подтвержденным диагнозом новой коронавирусной инфекции (SARS-CoV-2) и тяжелым течением вирусной пневмонии (более 3 баллов по шкале NEWS на момент поступления, КТ 3‒4, индекс оксигенации ниже 100, потребность как минимум в высокопоточной кислородотерапии). Основаниями для оценки развития у них кАФС являлась клиника прогрессирующей органной дисфункции, несмотря на проводимую интенсивную терапию; подозрение на тромбоэмболию легочной артерии и прогрессирующий тромбоз вен нижней конечности или подключичной вены. Обязательное условие ‒ отсутствие признаков присоединения бактериальной инфекции (прокальцитонин в крови менее 0,5 мкг/л). Диагностику антифосфолипидного синдрома осуществляли на основании выявления в крови антител к β-2-гликопротеину 1 (а/т β-2-ГП1 IgGAM, а/т β-2-ГП1 IgM, а/т β-2-ГП1 IgG) и к кардиолипину (а/т КЛ IgМ, а/т КЛ IgG) методом иммуноферментного анализа. Течение заболевания контролировали с помощью иных рутинно выполнявшихся клинических (t°, общий анализ крови и мочи) и биохимических исследований, отражавших выраженность системного воспалительного ответа (ферритин, ЦРБ, интерлейкин-6 и -18), состояние систем гемостаза, дыхания, кровообращения, печени и почек.

Результаты. Антифосфолипидные антитела (аАФЛ), умеренно превышающие референсные значения, выявлены у 9 (20%) пациентов из 45 обследованных в основном за счет изотипов IgА и IgM к β-2-гликопротеину 1 и изотипа IgM к кардиолипину. Оценка титра антител у 5 пациентов в динамике (через 7 сут) выявила их снижение, однако это не сказалось на исходе (4 из них умерли). У 36 больных обнаружены следы аАФЛ, не достигающие нижней границы нормы, несмотря на однотипность клинической картины и схожесть биохимических показателей, отражающих тяжесть органных нарушений. Отсутствие антител не предотвратило развитие тромботических осложнений (тромбозы крупных сосудов и тромбоэмболия легочной артерии у 5 больных). Не обнаружено других, часто ассоциируемых с кАФС проявлений (тромбоцитопении, гемолитической анемии, снижения концентрации фибриногена в крови).

Вывод. Катастрофический антифосфолипидный синдром не является обязательным при тяжелом течении COVID-19, но это, однако, не исключает вероятности его развития в качестве одного из проявлений тромбофилии, имеющей место у таких пациентов. 

Процитировать:
Полушин Ю.С., Гаврилова Е.Г., Шлык И.В., Лапин С.В., Ткаченко О.Ю. Катастрофический антифосфолипидный синдром при COVID-19. Вестник анестезиологии и реаниматологии. 2021;18(1):17-26. https://doi.org/10.21292/2078-5658-2021-18-1-17-26

Лапин С.В., Калленберг К.Г., Тотолян А.А. АПОПТОЗ Т-ЛИМФОЦИТОВ И АНТИФОСФОЛИПИДНЫЕ АНТИТЕЛА В КРОВИ БОЛЬНЫХ СИСТЕМНОЙ КРАСНОЙ ВОЛЧАНКОЙ.  Медицинская иммунология. 1999. № 1. С. 3.

Лабораторная диагностика антифосфолипидного синдрома (АФС) состоит в выявлении антифосфолипидных антител (АФА) методом иммуноферментного анализа (ИФА), а именно в детекции антикардиолипиновых (аКл) антител и антител к β2-гликопротеину (aβ2Гп). Несмотря на то, что серологическая диагностика играет решающую роль в постановке диагноза АФС, использование лабораторных тестов затруднено их недостаточной стандартизацией. Новым подходом к детекции антифосфолипидных антител стало использование иммуноблоттинга на основе поливинилиденфторидной (ПВДФ) мембраны. Преимущество этого метода по сравнению с методом ИФА — использование для сорбции антигенов гидрофобной твердой фазы. Пористая структура ПВДФ мембраны ориентирует гидрофильные участки фосфолипидов и обеспечивает тем самым более плотное их распределение, имитируя билипидный слой мембран живого организма. Для уточнения и сравнения ценности разных методов мы сопоставили результаты измерения АФА на ИФА тест-системах разных производителей и наборах реактивов для иммуноблоттинга. Нами собрана коллекция биоматериала 47 пациентов с некардиоэмболическими ишемическими инсультами, 20 пациентов с рецидивирующими тромбозами глубоких вен нижних конечностей и 50 пациентов с акушерской патологией, а также 30 здоровых доноров. В данных сыворотках измерены аКлаIgG, аКлаIgM, аβ2ГП1 методом ИФА с помощью немецких тест-систем фирм Euroimmun и Orgentec Diagnostica, образцы с наиболее высоким титром — методом иммуноблоттинга на реактивах фирмы Medipan. На основании измерений АФА различными ИФА тест-системами частота aβ2ГП1 составила 31% для Euroimmun ИФА наборов реактивов, 78% — для Orgentec Diagnostica ИФА тест-систем, аКлIgG — 2 и 30%, аКлIgM — 31 и 54% соответственно. Измерив АФА методом иммуноблоттинга на тест-системах фирмы Medipan в биообразцах с наиболее высокими титрами, мы обнаружили аβ2ГП1 у всех пациентов, аКлIgG — у 70%, аКлIgM — у 30% пациентов. Сходимость между тремя коммерческими наборами реактивов варьирует от 20 до 88%. Стандартизация коммерческих тест-систем все еще не достигнута. Новый метод иммуноблоттинга может быть использован в сочетании с классическими методами серологической диагностики АФС. Отсутствие алгоритмов диагностики и стандартизации различных тест-систем для детекции АФА ставит под сомнение достоверность серологического диагноза АФС, а следовательно и существование АФС как нозологической единицы.

Цель обзора: освещение представлений о современных методах выявления антифосфолипидных антител (АФА) в крови.

Основные положения. В настоящее время в большинстве клинических лабораторий уровень АФА измеряют методом иммуноферментного анализа с помощью специальных тест-систем, которые имеют ряд серьезных недостатков. Преимущества новых методов выявления АФА — улучшение параметров сорбции антигенов, автоматизация, мультиплексный подход. Хемилюминесцентные анализаторы позволяют добиться очень высокой точности при измерении высоких титров АФА и в диагностике антифосфолипидного синдрома демонстрируют чувствительность, достигающую 100%, при специфичности 72,3%. Мультиплексный лайн-дот быстрее и эффективнее выявляет женщин с наличием сразу трех видов АФА и дает возможность выделить среди них группу наибольшего риска осложнений беременности. Этот тест также обнаруживает антитела к домену 1 β2-гликопротеина I.

Заключение. Новые методы обнаружения АФА могут повысить точность диагностики аутоиммунных заболеваний.

Процитировать:

Ткаченко О.Ю., Лапин С.В., Мазинг А.В., Блинова Т.В., Бутина С.Е., Эмануэль В.Л. Новые методы выявления антифосфолипидных антител. Доктор.Ру. 2019; 10(165): 57–62. DOI: 10.31550/1727-2378-2019-165-10-57-62

Литературный обзор посвящён проблеме репродуктивных потерь, связанных с нарушениями иммунных механизмов, обеспечивающих прогрессирование беременности. Повышение экспрессии цитокинов Т-хелперов 1-го типа лежит в основе иммунной этиологии репродуктивных потерь. Снижение активности Т-регуляторных лимфоцитов приводит к развитию привычного невынашивания беременности. Представлены важнейшие механизмы цитокиновой регуляции прогрессирования беременности. Рассмотрены основные аутоиммунные состояния, ведущие к гибели плода: антифосфолипидный синдром, повышение активности натуральных киллеров, совместимость супругов по системе HLA, наличие антинуклеарных, антигистоновых, антиспермальных антител и антител к хорионическому гонадотропину человека. Представлены современные патогенетически обоснованные методы медикаментозной коррекции иммунологических механизмов привычного невынашивания беременности.

Беляева М.А., Бобров С.А., Лапин С.В. КЛИНИКО-ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ВЗАИМОСВЯЗИ ПРИ ПРИВЫЧНОМ НЕВЫНАШИВАНИИ БЕРЕМЕННОСТИ И МЕТОДЫ ИХ КОРРЕКЦИИ (ОБЗОР). Вестник Северо-Западного государственного медицинского университета им. И.И. Мечникова. 2015. Т. 7. № 3. С. 118-123.