1. Введение:
- Спикер: Лапин Сергей Владимирович, к.м.н, руководитель лаборатории диагностики аутоиммунных заболеваний СпбГМУ, эксперт IFCC, SD Committee «Harmonization of Autoimmune Tests (C-HAT)»
- Антифосфолипидный синдром (АФС) – аутоиммунное заболевание, характеризующееся тромбозами и акушерской патологией. Лабораторная диагностика основана на выявлении антифосфолипидных антител (аФЛ). Важно знать особенности интерпретации результатов.
2. Аутоиммунные заболевания и антитела:
- Аутоиммунные заболевания – большая группа патологий, требующих иммуносупрессивной терапии.
- Диагноз – клинико-лабораторный, с ключевой ролью аутоантител.
- Определение спектра аутоантител помогает в установлении диагноза.
- Важно учитывать, что антитела могут встречаться и у здоровых людей.
3. Антифосфолипидный синдром: критерии и патогенез:
- АФС характеризуется тромбозами и акушерскими осложнениями.
- Диагноз основывается на клинических и лабораторных критериях (во-лчаночный антикоагулянт, антитела к кардиолипину и бета-2-гликопротеину I).
- Антитела взаимодействуют с фосфолипидами и белками (бета-2-гликопротеин I), активируя систему свертывания крови.
4. Лабораторная диагностика и новые подходы:
- Диагностика АФС включает гуагулологические тесты, определение антител к кардиолипину, бета-2-гликопротеину I.
- Важна персистенция антител в высоком титре.
- Мультиплексный иммуноблот позволяет одновременно определять множество аФЛ, улучшая диагностику.
- Наличие нескольких типов антител указывает на высокий риск тромбоза.
5. Заключение:
- Диагностика АФС требует комплексного подхода.
- Определение спектра и уровня антител, использование тестов второго поколения (с оптимизированными антигенами) и учет клинических данных позволяют улучшить диагностику и стратификацию риска тромбоза.
Тромбофилия, так же как и множественная органная дисфункция, ‒ характерное проявление новой коронавирусной инфекции, протекающей в тяжелой форме, которое очень напоминает клиническую картину катастрофического антифосфолипидного синдрома (кАФС).
Цель: оценить, является ли кАФС обязательным проявлением тяжелых форм COVID-19.
Материал и методы: 45 пациентов с подтвержденным диагнозом новой коронавирусной инфекции (SARS-CoV-2) и тяжелым течением вирусной пневмонии (более 3 баллов по шкале NEWS на момент поступления, КТ 3‒4, индекс оксигенации ниже 100, потребность как минимум в высокопоточной кислородотерапии). Основаниями для оценки развития у них кАФС являлась клиника прогрессирующей органной дисфункции, несмотря на проводимую интенсивную терапию; подозрение на тромбоэмболию легочной артерии и прогрессирующий тромбоз вен нижней конечности или подключичной вены. Обязательное условие ‒ отсутствие признаков присоединения бактериальной инфекции (прокальцитонин в крови менее 0,5 мкг/л). Диагностику антифосфолипидного синдрома осуществляли на основании выявления в крови антител к β-2-гликопротеину 1 (а/т β-2-ГП1 IgGAM, а/т β-2-ГП1 IgM, а/т β-2-ГП1 IgG) и к кардиолипину (а/т КЛ IgМ, а/т КЛ IgG) методом иммуноферментного анализа. Течение заболевания контролировали с помощью иных рутинно выполнявшихся клинических (t°, общий анализ крови и мочи) и биохимических исследований, отражавших выраженность системного воспалительного ответа (ферритин, ЦРБ, интерлейкин-6 и -18), состояние систем гемостаза, дыхания, кровообращения, печени и почек.
Результаты. Антифосфолипидные антитела (аАФЛ), умеренно превышающие референсные значения, выявлены у 9 (20%) пациентов из 45 обследованных в основном за счет изотипов IgА и IgM к β-2-гликопротеину 1 и изотипа IgM к кардиолипину. Оценка титра антител у 5 пациентов в динамике (через 7 сут) выявила их снижение, однако это не сказалось на исходе (4 из них умерли). У 36 больных обнаружены следы аАФЛ, не достигающие нижней границы нормы, несмотря на однотипность клинической картины и схожесть биохимических показателей, отражающих тяжесть органных нарушений. Отсутствие антител не предотвратило развитие тромботических осложнений (тромбозы крупных сосудов и тромбоэмболия легочной артерии у 5 больных). Не обнаружено других, часто ассоциируемых с кАФС проявлений (тромбоцитопении, гемолитической анемии, снижения концентрации фибриногена в крови).
Вывод. Катастрофический антифосфолипидный синдром не является обязательным при тяжелом течении COVID-19, но это, однако, не исключает вероятности его развития в качестве одного из проявлений тромбофилии, имеющей место у таких пациентов.
Процитировать:
Полушин Ю.С., Гаврилова Е.Г., Шлык И.В., Лапин С.В., Ткаченко О.Ю. Катастрофический антифосфолипидный синдром при COVID-19. Вестник анестезиологии и реаниматологии. 2021;18(1):17-26. https://doi.org/10.21292/2078-5658-2021-18-1-17-26
Лабораторная диагностика антифосфолипидного синдрома (АФС) состоит в выявлении антифосфолипидных антител (АФА) методом иммуноферментного анализа (ИФА), а именно в детекции антикардиолипиновых (аКл) антител и антител к β2-гликопротеину (aβ2Гп). Несмотря на то, что серологическая диагностика играет решающую роль в постановке диагноза АФС, использование лабораторных тестов затруднено их недостаточной стандартизацией. Новым подходом к детекции антифосфолипидных антител стало использование иммуноблоттинга на основе поливинилиденфторидной (ПВДФ) мембраны. Преимущество этого метода по сравнению с методом ИФА — использование для сорбции антигенов гидрофобной твердой фазы. Пористая структура ПВДФ мембраны ориентирует гидрофильные участки фосфолипидов и обеспечивает тем самым более плотное их распределение, имитируя билипидный слой мембран живого организма. Для уточнения и сравнения ценности разных методов мы сопоставили результаты измерения АФА на ИФА тест-системах разных производителей и наборах реактивов для иммуноблоттинга. Нами собрана коллекция биоматериала 47 пациентов с некардиоэмболическими ишемическими инсультами, 20 пациентов с рецидивирующими тромбозами глубоких вен нижних конечностей и 50 пациентов с акушерской патологией, а также 30 здоровых доноров. В данных сыворотках измерены аКлаIgG, аКлаIgM, аβ2ГП1 методом ИФА с помощью немецких тест-систем фирм Euroimmun и Orgentec Diagnostica, образцы с наиболее высоким титром — методом иммуноблоттинга на реактивах фирмы Medipan. На основании измерений АФА различными ИФА тест-системами частота aβ2ГП1 составила 31% для Euroimmun ИФА наборов реактивов, 78% — для Orgentec Diagnostica ИФА тест-систем, аКлIgG — 2 и 30%, аКлIgM — 31 и 54% соответственно. Измерив АФА методом иммуноблоттинга на тест-системах фирмы Medipan в биообразцах с наиболее высокими титрами, мы обнаружили аβ2ГП1 у всех пациентов, аКлIgG — у 70%, аКлIgM — у 30% пациентов. Сходимость между тремя коммерческими наборами реактивов варьирует от 20 до 88%. Стандартизация коммерческих тест-систем все еще не достигнута. Новый метод иммуноблоттинга может быть использован в сочетании с классическими методами серологической диагностики АФС. Отсутствие алгоритмов диагностики и стандартизации различных тест-систем для детекции АФА ставит под сомнение достоверность серологического диагноза АФС, а следовательно и существование АФС как нозологической единицы.
Ткаченко О.Ю., Лапин С.В, Лазарева Н.М., Шмонин А.А., Соловьева Л.Н., Бондарева Е.А., Сельков, С.А., Чепанов С.В.,Тотолян А.А. Сравнительный анализ иммунологических методов детекции антифосфолипидных антител. Клиническая лабораторная диагностика. 2017; 62(1): 40-44.
Цель обзора: освещение представлений о современных методах выявления антифосфолипидных антител (АФА) в крови.
Основные положения. В настоящее время в большинстве клинических лабораторий уровень АФА измеряют методом иммуноферментного анализа с помощью специальных тест-систем, которые имеют ряд серьезных недостатков. Преимущества новых методов выявления АФА — улучшение параметров сорбции антигенов, автоматизация, мультиплексный подход. Хемилюминесцентные анализаторы позволяют добиться очень высокой точности при измерении высоких титров АФА и в диагностике антифосфолипидного синдрома демонстрируют чувствительность, достигающую 100%, при специфичности 72,3%. Мультиплексный лайн-дот быстрее и эффективнее выявляет женщин с наличием сразу трех видов АФА и дает возможность выделить среди них группу наибольшего риска осложнений беременности. Этот тест также обнаруживает антитела к домену 1 β2-гликопротеина I.
Заключение. Новые методы обнаружения АФА могут повысить точность диагностики аутоиммунных заболеваний.
Процитировать:
Ткаченко О.Ю., Лапин С.В., Мазинг А.В., Блинова Т.В., Бутина С.Е., Эмануэль В.Л. Новые методы выявления антифосфолипидных антител. Доктор.Ру. 2019; 10(165): 57–62. DOI: 10.31550/1727-2378-2019-165-10-57-62
Белолипецкая Е.А., Беляева И.Б., Мазуров В.И., Трофимов Е.А., Лапин С.В. КЛИНИКО-ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ВЗАИМОСВЯЗИ ПРИ СИСТЕМНОЙ КРАСНОЙВОЛЧАНКЕ С АНТИФОСФОЛИПИДНЫМ СИНДРОМОМ // Вестник Северо-Западного государственного медицинского университета им. И.И. Мечникова. - 2017. - Т. 9. - №3. - C. 7-11. doi: 10.17816/mechnikov2017937-11
Литературный обзор посвящён проблеме репродуктивных потерь, связанных с нарушениями иммунных механизмов, обеспечивающих прогрессирование беременности. Повышение экспрессии цитокинов Т-хелперов 1-го типа лежит в основе иммунной этиологии репродуктивных потерь. Снижение активности Т-регуляторных лимфоцитов приводит к развитию привычного невынашивания беременности. Представлены важнейшие механизмы цитокиновой регуляции прогрессирования беременности. Рассмотрены основные аутоиммунные состояния, ведущие к гибели плода: антифосфолипидный синдром, повышение активности натуральных киллеров, совместимость супругов по системе HLA, наличие антинуклеарных, антигистоновых, антиспермальных антител и антител к хорионическому гонадотропину человека. Представлены современные патогенетически обоснованные методы медикаментозной коррекции иммунологических механизмов привычного невынашивания беременности.
Беляева М.А., Бобров С.А., Лапин С.В. КЛИНИКО-ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ВЗАИМОСВЯЗИ ПРИ ПРИВЫЧНОМ НЕВЫНАШИВАНИИ БЕРЕМЕННОСТИ И МЕТОДЫ ИХ КОРРЕКЦИИ (ОБЗОР). Вестник Северо-Западного государственного медицинского университета им. И.И. Мечникова. 2015. Т. 7. № 3. С. 118-123.
Цель исследования: изучить влияние разных схем иммуносупрессивной терапии на клинико-иммунологическую активность и динамику антифосфолипидных антител (АФА) у больных системной красной волчанкой (СКВ) и антифосфолипидным синдромом (АФС) в зависимости от выявленных групп аллельных генов HLA локуса DRB1.
Материал и методы. В исследование включено 52 пациента с активной СКВ. Их разделили на две группы по 26 человек. Основную группу составили больные СКВ с АФА, 19 из них с АФС, контрольную – больные СКВ без АФА. В зависимости от терапии пациенты обеих групп были разделены на две подгруппы. Подгруппа А получала комбинированную пульс-терапию метилпреднизолоном 1000 мг в/в капельно № 3 и циклофосфамидом 1000 мг в/в капельно однократно. Кроме того, два пациента с СКВ и АФС применяли ритуксимаб 1000 мг в/в капельно два введения с перерывом две недели. Подгруппе Б назначены преднизолон 1 мг/кг/сут перорально в течение четырех недель, Плаквенил 200 мг/сут и азатиоприн 100 мг/сут. В дальнейшем все участники исследования получали комбинированную терапию: перорально преднизолон 0,5 мг/кг/сут со снижением дозы до 0,2 мг/кг/сут, Плаквенил 200 мг/сут и азатиоприн 100 мг/сут. Длительность наблюдения – шесть месяцев. Оценивались активность СКВ по индексу SELENA-SLEDAI, уровень антител к двуспиральной ДНК, компоненты комплемента и АФА, определялись группы аллельных генов HLA локуса DRB1.
Лабораторная диагностика антифосфоли пидного синдрома (АФС) состоит в выявлении антифосфолипидных антител (АФА) методом иммуноферментного анализа (ИФА), а именно в детекции антикардиолипиновых (аКл) антител и антител к бета-2-гликопротеину (aβ2Гп). Использование классических ИФА тест-систем затруднено их недостаточной стандартизацией. Новым подходом к детекции антифосфолипидных антител является использование иммуноблоттинга, преимуществом которого является сорбция антигенов на гидрофобной PVDF-мембране и комплексный подход к диагностике АФС.
В последние годы возрастает внимание к роли нарушений в системе гемостаза, в частности, к приобретенной иммунной тромбофилии – антифосфолипидному синдрому в развитии осложнений беременности. Антифосфолипидный синдром (АФС) – симптомокомплекс, сочетающий определенные клинические признаки и лабораторные данные: наличие антифосфолипидных антител (АФА) в сочетании с артериальными и венозными тромбозами, синдромом потери плода, иммунной тромбоцитопенией и\или неврологическими расстройствами. Встречаемость АФС у пациенток с отягощенным акушерско-гинекологическим анамнезом (ОАГА) и отягощенным тромботическим анамнезом (ОТА) достаточно велика. Эту категорию женщин необходимо обследовать на наличие патологии, чтобы определить группу риска по возможным осложнениям и при необходимости использовать дополнительные методы лечения для успешного исхода беременности.
Долгова Ю.С., Еремеева Д.Р., Зайнулина М.С., Лапин С.В., Ткаченко О.Ю. ВСТРЕЧАЕМОСТЬ АНТИФОСФОЛИПИДНЫХ АНТИТЕЛ ПРИ НАЛИЧИИ ОТЯГОЩЕННОГО АКУШЕРСКО-ГИНЕКОЛОГИЧЕКОГО АНАМНЕЗА И ОТЯГОЩЕННОГО ТРОМБОТИЧЕКОГО АНАМНЕЗА. Акушерство и гинекология Санкт-Петербурга. 2018. № 2. С. 7-7a.