Антинуклеарный фактор на клеточной линии HEp-2 с определением 6 типов свечения

Антинуклеарный фактор (АНФ) или антинуклеарные антитела (АНА) - это семейство аутоантител, связывающихся с рибонуклеиновыми кислотами и ассоциированными с ними белками. Они встречаются более чем у 90% больных с диффузными заболеваниями соединительной ткани, такими как системная красная волчанка (СКВ), системная склеродермия (СС), смешанное заболевание соединительной ткани (СмЗСТ) и синдром Шегрена (СШ). Использование клеточной линии HEp-2 является “золотым стандартом” для выявления АНФ.

При СКВ и других системных ревматических заболеваниях иммунный ответ направлен против нуклеопротеиновых антигенов, т.е. комплексов нуклеиновых кислот и белков. Эти эндогенные нуклеопротеиновые комплексы образуются в ходе процесса апоптоза эпителиоцитов и напоминают чужеродные вирусные частицы. Ускорение процессов апоптоза под действием ультрафиолетового облучения, вирусных инфекций и лекарственных препаратов запускает аутоиммунные ответы при СКВ. При апоптозе основные антигены антител конденсируются в апоптотических тельцах, которые становятся мишенью для аутоантител. В настоящее время описаны около 200 разновидностей антител к нуклеопротеинам и рибонуклеиновым кислотам, которые получили название антинуклеарные антитела. При аутоиммунных заболеваниях аутоантитела к ядерным антигенам не обладают прямым цитотоксическим действием на клетки человека, однако иммунные комплексы способны запускать иммунологическое воспаление особенно в местах, где сосуды особенно тонки, в том числе в почках, коже, ЦНС, синовиальной оболочке суставов, плевре.

Исследование антинуклеарного фактора (АНФ) представляет собой основной метод выявления антинуклеарных антител, позволяя выявлять аутоантитела к нуклеиновым кислотам (дсДНК, осДНК, РНК), рибонуклеопротеинам, а также большинству конформационных и нерастворимых антигенов.

Антинуклеарные антитела обнаруживаются благодаря их связыванию с внутриклеточными антигенами перевиваемой линии клеток эпителия человека (HEp-2). Ядро и цитоплазма клеток НЕр-2 содержит все антигены характерные для человеческого организма, что позволяет выявлять в одном тесте все основные антинуклеарные антитела. Метод непрямой иммунофлюоресценции на клеточной линии HEp-2 рекомендован в качестве золотого стандарта выявления антинуклеарных антител ведущими европейскими (EASI group 2010) и американскими экспертами (ACRANATaskforce 2008). В силу многообразия антигенов антинуклеарных антител не все они могут быть очищены или синтезированы для использования в иммуноферментных тестах по выявлению антинуклеарных антител.

Позитивность по АНФ на клеточной линии НЕр-2 отмечается при системной красной волчанке (СКВ), системных ревматических заболеваниях и многих аутоиммунных заболеваниях, что делает его универсальным тестом в обследовании больных с аутоиммунной патологией. Положительный результат АНФ отмечается более чем у 90% больных с диффузными болезнями соединительной ткани, такими как системная красная волчанка и кожные формы этого заболевания, склеродермия и ее разновидности, смешанное заболевание соединительной ткани, синдром Шегрена. Выявление АНФ имеет большое значение в диагностике ювенильного ревматоидного артрита и аутоиммунных заболеваний печени. Представители этого семейства аутоантител могут быть обнаружены при множестве других аутоиммунных (тиреоидит, диабет), инфекционных (вирусный гепатит), воспалительных и онкологических заболеваний. Встречаемость АНФ достигает 1-3% у клинически здоровых людей и несколько возрастает у лиц старше 65 лет. Лица с высокими титрами АНФ имеют повышенный риск развития аутоиммунных заболеваний.

Интерпретация:

Результатом определения АНФ является титр, представляющий собой значение конечного разведения сыворотки, при котором сохраняется значимая флюоресценция ядра. Чем выше знаменатель дроби, тем больше разведение сыворотки, тем больше антител в сыворотке больного. Высокие титры разведения сыворотки отражают высокую аффинность и концентрацию аутоантител.

• Выявление высоких тиров (1/640 и выше) указывает на высокую вероятность системного ревматического заболевания или аутоиммунного заболевания печени и требует внимательного клинического, лабораторного и инструментального обследования. Отсутствие повышенных титров антинуклеарного фактора значительно снижает вероятность системных аутоиммунных заболеваний.

• В низких титрах (до 1/160) антинуклеарный фактор может отмечаться у 1-2% здоровых лиц и родственников больных с системными заболеваниями. Частота положительных титров в популяции несколько увеличивается с возрастом. Низкие титры антинуклеарных антител могут встречаться при многих аутоиммунных, инфекционных и онкологических заболеваниях. Отсутствие высоких титров антинуклеарных антител значительно снижает вероятность системного ревматического процесса и может использоваться скорее для исключения, чем подтверждения диагноза.

Повышение титров АНФ в динамике указывает на обострение системного заболевания, так, при СКВ титр коррелирует с тяжестью процесса и снижается при эффективности проводимой терапии.

Кроме титра сыворотки, при положительном результате анализа описывается тип свечения ядра. Он обусловлен широким спектром антител, которые находят свои мишени внутри клетки.

Описано более 20 типов свечения, однако в клинической практике используется 8 из них:

Примечания: СКВ – системная красная волчанка, ДКВ - дискоидная красная волчанка, РА - ревматоидный артрит, ЮРА – ювенильный ревматоидный артрит

Иногда могут быть описаны 2 типа свечения, при котором один в низких титрах маскирует другой. При выявлении положительного результата АНФ необходимо постараться установить антигенные мишени антинуклеарных антител, с помощью выявления антител к двуспиральной ДНК и антител к нуклеосомам (см. описание), иммуноблота антинуклеарных антител (см. описание), иммуноблота антител при склеродермии, иммуноблота антител при полимиозите и определения антител к кардиолипину (см. описание).